多脊椎是存在于蒙古系绵羊群体中重要的形态学性状,动物的脊椎包括颈、胸、腰、荐、尾椎,但在多脊椎羊研究中脊椎数通常指胸、腰椎数。正常绵羊脊椎数为19枚（T13L6）,多脊椎绵羊的脊椎数为20枚（T13L7或T14L6）,有的达到21枚（T14L7）,其中T表示胸椎,L表示腰椎,数字表示椎骨数。人们确定绵羊个体脊椎数的方法常常只有徒手触摸或屠宰后验证。能够在活体状态下确定乌珠穆沁羊的脊椎数,对于多脊椎羊的筛选以及新品系选育具有重要的价值。本试验首次建立了保定架结合数字化X线摄影（Digital Radiography,DR）成像技术检测绵羊脊椎方法,经验证准确率100%,并利用该活体检测法,于2020年10月检测了乌珠穆沁羊原种场存栏的成年羊576只,2021年又检测羔羊525只,并确定了该羊场中多脊椎绵羊的比率。同时挑选出脊椎数为21（T14L7）的公羊3只,采其精液,对265只不同脊椎表型的母羊人工输精,于2021年4月对出生的羔羊进行脊椎数检测。统计后代羔羊脊椎表型,初步研究T14L7公羊与各个脊椎类型母羊产不同脊椎表型后代羊的数量及比例,确定本交组合类型。从原种场中筛选4种脊椎表型共96只羊,采集血液提取DNA进行高通量测序,开展全基因组关联分析,筛选定位与多脊椎性状相关基因;选择分析结果中的5个单核苷酸（SNP）突变基因,分别设计引物,进行PCR扩增,进行一代正向测序,验证高通量测序的准确性。为揭示多脊椎形成机制奠定基础。研究结果表明:测定乌珠穆沁羊原种场2020年存栏成年羊共576只,四种脊椎表型都存在。多脊椎羊占比95.7%。其中T13L6型25只,占比4.3%;T13L7型343只,占比59.6%;T14L6型177只,占比30.7%;T14L7型31只,占5.4%。2021年出生羔羊共525只羊,脊椎表型仍为上述4种,多脊椎羔羊占97.1%,其中T13L6型15只,占比2.9%;T13L7型282只,占比53.7%;T14L6型190只,占比36.2%;T14L7型38只,占比7.2%。265只人工输精试验的母羊中,有T13L6表型试验母羊11只,其产后代有T13L6脊椎表型2只,占比18.2%,其余为多脊椎,占比81.8%;有T13L7表型试验母羊148只,其产后代有T13L6脊椎表型1只,占比0.7%,多脊椎表型占比99.3%;有T14L6表型试验母羊94只,其产后代有T13L6脊椎表型1只,占比1.1%,其余均为多脊椎羊,占比高达98.9%;有T14L7表型试验母羊12只,其产后代无正常脊椎羊,均为多脊椎羊,因此占比100%。所有人工输精试验母羊中,多脊椎表型羊产后代数量在种群中占比高达99.2%,上述4种配种方案产多脊椎羊比例很大,可用于建立多脊椎乌珠穆沁羊品系。全基因组关联分析结果表明:当曼哈顿图阈值为4时:T13L7与T13L6对比组得到9个显著SNP位点,只注释到三个已知基因,分别为BRK1、FANCD20S、RBFOX1基因。T14L6与T13L6对比组虽得到174个显著SNP位点,但未注释到脊椎发育有关功能。当阈值为3.5时:T13L7与T13L6对比组得到2562个显著SNP位点,注释到参与软骨发育的SATB2、SMAD9、HOXB3基因。T14L6与T13L6对比组得到6447个显著SNP位点,注释到参与骨髓细胞分化调控的LEO1、MEIS2、CDK6基因,参与胚胎形态发育的C2CD3、WDPCP、ROR2基因。当阈值为3时:T13L7与T13L6对比组得到10551个显著SNP位点,注释到骨细胞增殖有关的ABL1、ITGAV、TMEM119基因,注释到参与胚胎发育的BRK1、ERCC2、FOXP1、RCN1、MGAT1等基因;PCR产物一代测序验证高通量测序的SNP位点一致性试验中,已验证的位点一致率平均为98%。结论:建立的保定架结合DR成像技术检测绵羊脊椎方法准确率高,可以应用于生产实际;该羊场初步建立了多脊椎乌珠穆沁羊基本品系,多脊椎羊比例达到95%以上;T14L6型、T13L7型母羊和T14L7公羊更适用于建立多脊椎乌珠穆沁羊稳定品系。全基因组关联分析结果表明参与胚胎发育的BRK1、ERCC2、FOXP1、RCN1、MGAT1等基因可能参与多脊椎形成。