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非洲猪瘟（African swine fever,ASF）是由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）引起起猪的一种急性、热性、高度传染性传染病。被世界卫生组织列为必须报告的疫病,在我国被列为一类动物疫病。该病特点是病程快而急,临床上多表现发热出血,该病传染性强,通过直接或间接非洲猪瘟病毒进行大范围上传播,虽然不是人畜共患病,但是会经过物传动物使猪患病,且致死量很高,一旦发现就要大量扑杀,是养猪业避之不及的传染病。非洲猪瘟病毒的结构复杂为二十面体结构,且能编码150多种蛋白,目前尚未完全了解其全部蛋白功能,而探索蛋白的功能和特性对研发疫苗及筛选检测靶标显得尤为重要。K78R基因位于拟核内,表达p10蛋白,目前认为其主要功能是与复制相关,但其是否具有免疫原性以及机体对p10蛋白的应答规律尚不明确。S273R基因位于核壳内,表达pS273R蛋白,是具有水解功能的酶。本试验主要针对非洲猪瘟病毒的K78R和S273R两个基因编码的p10蛋白和pS273R蛋白进行研究,研究内容如下:（1）构建pET-32a-p10和pET-32a-pS273R原核表达重组质粒:以实验室保存的ASFV SY18全基因组为模板,由设计的特异性引物从中扩增出K78R和S273R基因,经过与空载体pET-32双酶切,T4连接酶连接,转化至大肠杆菌DH5α克隆菌中,将菌液PCR鉴定正确的阳性克隆子送去吉林省库美生物有限公司测序正确后,提取重组质粒并转化至BL21（DE3）表达菌中,经过预实验确定最佳诱导条件后大量诱导,裂解破碎菌体后与Ni-NTA亲和层析柱孵育纯化带有His标签的融合蛋白,经SDS-PAGE和Western-blot鉴定,纯化出条带单一的特异性融合蛋白。（2）建立p10蛋白间接ELISA抗体检测方法:利用原核表达的p10蛋白包被于ELISA酶标板,以免疫猪血清作为检测样品,以酶标羊抗猪二抗作为检测抗体,经过TMB显色液;并经过棋盘法验证确定P/N值最大的反应条件,确定包被抗原浓度为2μg/ml p10蛋白,待检血清稀释500倍,市售HRP标记的二抗1:15 000倍稀释。经检测确认该方法重复性较好,与西班牙INGENASA公司的非洲猪瘟阻断ELISA诊断试剂盒检测相同样品,总符合率为88%。经检测大量血清样品发现该方法检测的抗体值与感染猪的体内病毒含量具有高度一致的相关性,即Cq值越低,体内病毒含量越高,p10检测的抗体值越高。所以此方法可以通过采血检测家猪体内是否产生针对p10蛋白的抗体,从而得知猪体内病毒含量情况,该方法为检测猪免疫反应及感染情况提供了新思路。与此同时,我们还针对p10、pS273R蛋白制备兔抗p10和兔抗pS273R的多克隆抗体:将纯化的p10、pS273R蛋白与弗氏佐剂等体积混合,超声仪处理其至油包水乳浊液状态后多次免疫新西兰大白兔,间隔一周采血制备多克隆抗体,经间接ELISA测得抗体效价分别达到1:32 000和1:64 000,并进行了Western-blot验证,证明成功制备了具有特异性的多克隆抗体。在此基础上用两种兔抗多克隆抗体与带红色荧光的缺失毒ASFV SY18-△MGF做了中和试验,发现无中和作用。综上,通过本研究,我们构建了pET-32a-p10和pET-32a-pS273R的原核表达重组质粒,建立了以p10蛋白为抗原的间接ELISA抗体检测方法,制备了兔抗多克隆抗体,为探究其反应原性及免疫原性奠定基础,在建立非洲猪瘟检测方法及筛选疫苗株方向上更进一步。