【摘 要】
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男性不育症约占不育夫妇的50%,胞浆内精子注射失败的男性因素相关原因包括精子缺乏、精子发育不成熟、精子结构异常和精子具有核损伤。精子结构的完整性是精子获能和运动的基础。目前对于精子结构具体功能的深入研究使人们对于精子有了更全面的了解。但是许多睾丸特异性基因在精子发生过程中,特别是在具体结构中行使的功能机制有待进一步探究。 TMEM232作为一种跨膜蛋白,已有报道其mRNA水平在小鼠睾丸中高表达,
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男性不育症约占不育夫妇的50%,胞浆内精子注射失败的男性因素相关原因包括精子缺乏、精子发育不成熟、精子结构异常和精子具有核损伤。精子结构的完整性是精子获能和运动的基础。目前对于精子结构具体功能的深入研究使人们对于精子有了更全面的了解。但是许多睾丸特异性基因在精子发生过程中,特别是在具体结构中行使的功能机制有待进一步探究。
TMEM232作为一种跨膜蛋白,已有报道其mRNA水平在小鼠睾丸中高表达,但是目前没有相关功能方面的报道。本课题采用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建TMEM232敲除小鼠模型探究TMEM232的功能作用。结果发现TMEM232敲除雄鼠出现不育现象,显微镜下观察到精子动能几乎丧失。透射电镜下观察到TMEM232敲除小鼠的精子结构异常,初步发现精子环结构缺失,通过免疫荧光技术进一步发现精子环组成蛋白Septin12的缺失。精子环Annulus是一种基于Septin的环结构,位于质膜下方,连接哺乳动物精子鞭毛的中段和主段。目前研究提出该环在精子发生过程中充当形态组织器,引导鞭毛组装,并作为扩散屏障,将蛋白质限制在成熟精子中鞭毛的不同区室。另一方面,透射电镜结果发现精子鞭毛的轴丝骨架(9+2)结构中,一组二联体微管缺失。为了进一步了解TMEM232对精子结构的影响,以成熟小鼠附睾样品为材料运用定量蛋白质组学分析,鉴定出了255个基因的蛋白表达出现下调,88个基因的蛋白表达出现上调,通过western blot和免疫荧光技术也验证了组学分析结果的可靠性。对差异表达蛋白进行GO分类、KEGG通路和蛋白结构域三个层面的富集分析发现,该基因主要影响了精子的鞭毛运动、精子获能能力、精子结构的完整性和稳定性。这些研究的初步结果让对TMEM232在精子发生中发挥的功能有了新的认识。
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