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第一部分 脂联素对滤泡辅助性T细胞产生的影响实验目的探讨脂联素（Adiponectin,AD）影响对于滤泡辅助性T细胞（T follicular helper cells,Tfh）产生的影响。实验方法磁珠分选正常人外周血CD4+T细胞,流式细胞术（Fluorescence Activated Cell Sorter,FACS）检测Tfh（CD4+CXCR5+PD-1+）表面脂联素受体 1（Adiponectin Receptor 1,AdipoR1）的表达;磁珠分选正常人外周血CD4+T细胞,加入 anti-CD3 mAb（5μg/ml）和 anti-CD28 mAb（3 μg/ml）刺激细胞,并分别向上述培养体系中加入不同浓度AD（5 μg/ml或25 μg/ml）培养3天,收集细胞,FACS检测Tfh比例、显微镜下对细胞进行计数。磁珠分选正常人外周血CD4+T细胞,分别用无血清、2%FBS、5%FBS培养基培养细胞,加入 anti-CD3 mAb（5 μg/ml）和 anti-CD28 mAb（3 μg/ml）刺激细胞,并分别向上述培养体系中加入不同浓度AD（5 μg/ml或25 μg/ml）培养3天,收集细胞,FACS检测Tfh比例。磁珠分选正常人外周血CD4+T细胞,向其转染AdipoR1小干扰RNA（Small interfer RNA,siRNA）,加入anti-CD3 mAb（5 μg/ml）和 anti-CD28 mAb（3 μg/ml）刺激细胞,并分别向上述培养体系中加入不同浓度AD（5 μg/ml或25 μg/ml）培养3天,收集细胞,FACS检测Tfh比例。Ⅱ型胶原酶消化RA或OA患者行关节置换术时留取的滑膜组织,获得RA滑膜成纤维细胞（RA fibroblast-like synoviocytes,RA FLSs）或OA滑膜成纤维细胞（OA fibroblast-like synoviocytes,OA FLSs）,分别用不同浓度 AD（5 μg/ml 或 25μg/ml）刺激RA或OAFLSs,3天后弃培养上清,PBS清洗2遍,并将其与正常人CD4+T细胞共培养3天,收集细胞,FACS检测Tfh比例。实验结果Tfh表面表达AdipoR1。用无血清、2%FBS、5%FBS及10%FBS的培养基培养细胞,AD刺激后Tfh 比例无统计学差异。干扰CD4+T细胞表面AdipoR1,AD刺激后Tfh比例无明显变化。将RA或OAFLSs与CD4+T细胞共培养,AD（25 μg/ml）刺激的共培养体系中Tfh比例明显升高,且差异具有统计学意义,而AD刺激的OAFLSs共培养体系中Tfh比例无明显变化。实验结论体外AD对Tfh产生无直接影响。AD通过刺激RA FLSs间接促进Tfh产生。第二部分 脂联素通过促进RA FLSs分泌IL-6上调Tfh产生实验目的探讨AD通过刺激RA FLSs上调Tfh产生的具体机制。实验方法分别利用细胞间直接接触及Transwell小室,将AD刺激后的RA FLSs与正常人CD4+T细胞共培养3天,收集细胞,FACS检测Tfh比例。收集AD刺激后的RA FLSs与正常人CD4+T细胞共培养上清,蛋白芯片和ELISA检测上清中可溶性因子水平。向AD刺激后的RAFLSs与CD4+T细胞共培养体系中加入IL-6和/或IL-21拮抗剂,培养3天后收集细胞,FACS检测Tfh比例。分别用不同浓度AD（5 μg/ml或25 μg/ml）刺激RA FLSs,ELISA检测培养上清中IL-6水平。siRNA转染RAFLSs,干扰其表面AdipoR1表达,AD刺激RAFLSs 3天,ELISA检测培养上清中IL-6水平。实验结果AD刺激RAFLSs与CD4+T细胞在直接接触和Transwell小室两种共培养体系中Tfh比例无统计学差异。与对照组相比,AD刺激后的RA FLSs与CD4+T细胞共培养上清中IL-6和IL-21水平显著增高。与对照组相比,拮抗AD刺激后的RA FLSs与CD4+T细胞共培养体系中IL-6而非IL-21可显著下调Tfh比例。与对照组相比,AD刺激RA FLSs组培养上清中IL-6水平显著升高,干扰RA FLSs表面AdipoR1表达后,AD刺激组培养上清中IL-6水平显著下降。实验结论体外AD通过促进RA FLSs分泌可溶性因子IL-6上调Tfh产生。第三部分 关节腔注射脂联素对CIA小鼠病情及Tfh产生影响实验目的体内观察AD对CIA小鼠病情及关节局部Tfh产生的影响。实验力法诱导CIA模型,在诱导后D17、D20及D23于左侧膝关节关节腔内分别注射AD,浓度为1 μg/μl,注射剂量为10 μl,评估AD注射前后对CIA小鼠关节炎严重程度的影响。于首次免疫后D45处死小鼠,流式细胞仪检测关节局部Tfh比例;RT-PCR检测转录因子及功能分子Bcl-6、Blimp-1、IL-6、IL-21水平。实验结果与CIA组相比,关节局部注射AD组发病时间提前,且关节严重程度增加。与正常小鼠组相比,CIA小鼠关节局部Tfh 比例显著升高;关节局部注射AD组关节局部Tfh 比例显著高于CIA组;关节局部注射AD组小鼠关节局部Bcl-6、IL-6、IL-21 mRNA 升高,Blimp-1 mRNA 水平显著降低。实验结论关节局部注射AD可加重CIA小鼠病情,且关节局部Tfh比例及相关功能分子水平显著上调。