猪源芽孢微生态制剂Z-27菌株的分离及应用

来源 :河北农业大学 | 被引量 : 7次 | 上传用户:ccsrg
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腹泻是集约化养猪生产条件下较严重的疾病之一,尤其是在仔猪时期,腹泻的发生率相当高,给养猪业造成巨大的经济损失。微生态制剂可调整机体的微生态平衡,抑制致病菌在肠道内的繁殖,在防治腹泻的同时也避免了病原菌耐药性的产生,有着抗生素无法比拟的优点。芽孢杆菌制剂是微生态制剂的一种,其具有耐高温、耐酸碱等优点。芽孢杆菌微生态制剂可在动物肠道中产生蛋白酶、淀粉酶等多种消化酶,协助机体分解消化营养物质,提高饲料转化率,降低养殖成本。本试验以健康仔猪粪便为样品,利用胆酸盐平板法和产酶平板法结合进行菌株初筛,利用病原菌平板法进行复筛,并通过人工胃液耐受性、人工肠液耐受性、高温耐受性、产物性质分析及饲喂安全性试验等,最终分离筛选得到耐0.3%胆酸盐、产生多种消化酶和对病原菌拮抗活性最强的Z-27菌株。经“中国农业微生物菌种保藏管理中心”从形态特征、生理生化特性、MIDI脂肪酸及16s rDNA测序等方面对菌株进行菌种鉴定,Z-27菌株被鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。为了提高Z-27菌株发酵液的菌体浓度和芽孢浓度,对菌株的发酵条件进行了优化。通过单因素试验和正交试验确定了Z-27菌株的最佳培养基为:玉米粉1.0%、豆饼粉1.5%、MnSO4·H2O0.07%、NaH2PO4·2H2O0.2%、Na2HPO4·2H2O0.4%、起始pH7;最佳摇瓶发酵条件为:最适接种量2.0%、最适温度37℃、摇床转速200r·min-1、摇瓶装液50mL/250mL、发酵周期34h。优化后Z-27菌株发酵液的菌体浓度为1.83×109cfu·mL-1,芽孢形成率达到95%以上。在饲料中添加0.1%的Z-27菌剂进行仔猪饲喂试验,结果表明,与对照组相比,试验组仔猪粪便中大肠杆菌数量降低了61.0%,乳酸菌、双歧杆菌和芽孢杆菌数量分别提高46.0%、47.4%和39.8%;试验组仔猪粪便中蛋白酶、α-淀粉酶、纤维素酶和脂肪酶的平均活力分别提高了62.99%、34.56%、133.10%和66.57%;试验组粪便中的粗蛋白、淀粉、粗脂肪和粗纤维等有机成分含量比对照组分别下降了30.51%、52.13%、18.44%和26.73%,而无机成分的含量基本无变化。试验组仔猪的平均日增重提高了9.38%,料重比降低了4.94%,腹泻率下降幅度达83.22%。在肥育猪试验中也得到相似结果。枯草芽孢杆菌Z-27制剂具有维护仔猪肠道微生态平衡、减少腹泻、提高仔猪肠道消化酶活力、提高饲料转化率、改善仔猪生长性能的作用,为研制芽孢型防腹泻益生菌剂提供了新菌源。
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