我国是包虫病发病最高的国家之一,在许多高发区,如:新疆、青海、甘肃、宁夏等,有5%-10%的人感染。采用疫苗预防是彻底控制包虫病在我国牧区流行的迫切需要。目前Eg95抗原被认为是最有效的侯选疫苗分子,但是细粒棘球蚴各株系之问存在着实质性的遗传变异性,来源于不同地域及不同宿主的Eg95基因之间也存在着差异。本研究用RNAiso Reagent和Universal Genomic DNA Extraction Kit试剂盒分别提取了总RNA和DNA。根据己报道Eg95序列设计引物,用PCR方法扩增出目的基因,将Eg95-XJ抗原基因构建至克隆载体pGM-T上,通过蓝白菌落筛选、鉴定阳性克隆后,进行测序,利用DNAman软件及GenBank/BLAST功能,对其进行序列分析及同源性比较。用设计的特异性引物扩出外显子Ⅱ,约300bp,再将该基因克隆至pGEX-6P-1载体,经鉴定后在大肠杆菌BL21中表达蛋白。试验一结果显示:以原头蚴总RNA反转录cDNA为模板,扩增出的片段不是Eg95,推断是采样后处理不当;但以其DNA为模板,测序结果显示该基因片段为1304bp,与GenBank中已知的Eg95基因同源性在86%~99%之间,其差异大都集中在内含子区;与青海株Eg95基因家族成员同源性最高达97%~99%。这些结果表明,这一新疆地区的Eg95-XJ-1基因为Eg95基因家族成员之一。试验二结果表明:目的基因己经以正确方向插入到pGEX-6P-1载体中,在BL21表达系统中能够表达出大约10kD的Eg95蛋白,说明pGEX-6P-1/Eg95-XJ原核表达质粒构建成功,能够作为侯选基因疫苗进一步开展棘球蚴病的基因疫苗免疫预防奠定了基础。