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背景:抗生素自发现至今,在医疗卫生方面扮演着重要角色,拯救了无数的生命,并且为了人类健康的维持和生命的延续,提供了安全保障。但由于长期的广泛使用,甚至滥用的情况十分严重,各种微生物对抗生素的抵抗能力越来越强,越来越多的耐药菌株随之出现,并且迅速蔓延,这严重威胁到了人类的生存安全。为了解决这一难题,人们开始寻找新的抗菌剂,以替代或辅助抗生素的使用。纳米银为一种新型的抗菌剂,具有小尺寸效应,杀菌能力高效,抗菌谱广,对细菌和真菌不易产生耐药性等诸多优点,是一种解决上述问题的理想选择。但目前存在的问题是大多数传统方法所制备的纳米银的稳定性较差,杀菌能力并不稳定,并且可能带有化学或生物物质残留,存在一定的安全隐患,这些问题都制约着纳米银产品在医疗上的应用前景。为此,制备一种稳定性好,安全性高具有良好杀菌效果的纳米银制剂是非常有必要的。本研究中所使用的纳米银水剂是由烟台海灵生物技术有限公司提供,其制备方法为物理方法,该法所得成品中除有效物质外,几乎不含其他残留物质,所以更适合在生物医疗方面应用。目的:检测理化因素及聚乙烯吡咯烷酮(PVP-K30)保护剂对纳米银水剂稳定性的影响。意义:为该纳米银水剂在医疗卫生方面的广泛应用提供技术支撑。方法:1.通过制成含有相同浓度纳米银水剂(5μg/m L),而含有不同浓度葡萄糖(0、2.8、5.6、11.2、22.4、44.8、89.6、112、140、180、240、280μg/m L)的结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)培养基,观察各组培养基中接种大肠杆菌后,同一温度下的细菌生长状况,验证不同葡萄糖浓度对纳米银水剂的稳定性是否产生影响。2.建立9.5、14.25、19、23.75、28μg/m L五个纳米银水剂浓度梯度,每个浓度梯度再经四个不同p H值(4.16、4.22、4.34、4.38)处理,通过抑菌环实验检验不同的p H值对不同浓度梯度纳米银水剂的稳定性是否产生影响。3.将纳米银水剂(5μg/m L)在不同温度下处理10 min后,制成结晶紫中性红胆盐琼脂培养基,观察接种大肠杆菌后的细菌生长状况,检验不同温度对纳米银水剂的稳定性是否产生影响。4.将纳米银水剂(5μg/m L)暴露在紫外光(波长为253.7 nm)下分别照射1h、2 h、3 h、4 h,然后制成结晶紫中性红胆盐琼脂平板,观察接种大肠杆菌后的细菌生长状况,检测紫外光照射对该纳米银水剂的稳定性是否产生影响。5.将纳米银水剂(5μg/m L)用超声波(53 k Hz)分别处理0.5 h、1 h、1.5 h,然后制成结晶紫中性红胆盐琼脂平板,观察接种大肠杆菌后的细菌生长状况,检验紫外光照射对纳米银水剂的稳定性是否产生影响。6.以聚乙烯吡咯烷酮(PVP-K30)为保护剂,与纳米银水剂(5μg/m L)共同制成结晶紫中性红胆盐琼脂平板(PVP-K30浓度为2×10~4μg/m L),然后按照方法3操作,检测PVP-K30是否在不同温度下对纳米银水剂的稳定性有保护作用。7.以PVP-K30为保护剂,与纳米银水剂(5μg/m L)共同制成结晶紫中性红胆盐琼脂平板(PVP-K30浓度为2×10~4μg/m L),然后按照方法4操作,检测PVP-K30是否对经紫外照射的纳米银水剂的稳定性有保护作用。8.以PVP-K30为保护剂,与纳米银水剂(5μg/m L)共同制成结晶紫中性红胆盐琼脂平板(PVP-K30浓度为2×10~4μg/m L),然后按照方法5操作,检测PVP-K30是否对超声波处理的纳米银水剂的稳定性有保护作用。结果:1.与未加葡萄糖的纳米银水剂相同,2.8~280μg/m L浓度葡萄糖的VRBA培养基平板表面没有菌落生长,但相同条件下无纳米银水剂的VRBA培养基长满了菌落。2.纳米银水剂本身的p H值是偏酸性的。不同纳米银水剂浓度所制成的抑菌片均产生了抑菌环。在相同的p H值条件下,抑菌片所产生抑菌环的直径大小随纳米银水剂浓度的升高而增大。在相同的纳米银水剂浓度条件下,9.50μg/m L、14.25μg/m L、19.00μg/m L三个纳米银水剂浓度组内在不同p H值条件下所产生的抑菌环直径大小基本相似,但在23.75μg/m L、28.00μg/m L两个纳米银水剂浓度组内,只有p H 4.34组所产生抑菌环直径大小差异明显,其他p H值组的抑菌环直径相似。3.82~96℃处理组的VRBA培养基平板表面没有菌落生长,但98℃和100℃处理组中菌落生长状态良好,与无纳米银水剂的VRBA培养基的菌落生长状态相同。4.4个紫外照射时间组的VRBA培养基平板均长满菌落,与相同条件下无纳米银水剂的VRBA培养基的菌落生长状态相同。5.未经超声波处理的纳米银水剂组,VRBA培养基平板表面没有菌落生长,但超声波处理的三个实验组的VRBA培养基平板表面均长满菌落,与不含纳米银水剂的空白对照组没有显著差异。6.在80℃-90℃区间分组中,含PVP-K30和不含PVP-K30的VRBA培养基平板表面均没有菌落生长;但在90~100℃区间内,结果出现了差异:含PVP-K30保护剂的92~98℃分组没有出现菌落生长,但100℃时出现了菌落生长;不含PVP-K30保护剂的纳米银水剂组只在100℃出现了菌落生长。7.含PVP-K30的纳米银水剂组中,紫外照射1 h、2 h、3 h三组平板表面只有少量菌落出现,但紫外照射4 h组出现大量菌落生长,四个分组中菌落数量随照射时长增加而增加。但相比之下,不含PVP-K30的纳米银水剂组平板表面菌落数量明显增多。8.在超声波处理的含PVP-K30和不含PVP-K30的纳米银水剂的VRBA培养基平板表面均没有菌落生长,没有显著差异。结论:1.高温(>98℃)、紫外照射和超声波处理对纳米银水剂的稳定性有显著的破坏作用。2.一定的葡萄糖浓度(2.8~280μg/ml)和p H值(4.16~4.38)对纳米银水剂的稳定性没有显著的影响作用。3.PVP-K30保护剂,可一定程度的保护纳米银水剂在高温和紫外线照射条件下的稳定性,但对超声波处理没有保护作用。