【摘 要】
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目的：对5-FU诱导结肠癌CD133+细胞发生自噬的过程进行观察,并且初步探讨自噬对5-FU细胞毒效应的影响。方法：(1)MTT法检测结肠癌SW480细胞的增殖抑制率及IC50。(2)免疫磁珠分选
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目的：对5-FU诱导结肠癌CD133+细胞发生自噬的过程进行观察,并且初步探讨自噬对5-FU细胞毒效应的影响。方法：(1)MTT法检测结肠癌SW480细胞的增殖抑制率及IC50。(2)免疫磁珠分选技术分选CD133+细胞,无血清悬浮培养法富集CD133+细胞。(3)透射电子显微镜(TEM)观察细胞超微结构,MDC染色并荧光显微镜观察自噬囊泡,流式细胞术检测自噬强度,Western blotting检测经5-FU处理后细胞内LC3-Ⅱ蛋白的表达水平。(4)联合应用细胞周期检测、细胞活性实验、克隆形成实验、博依登小室实验研究自噬对5-FU细胞毒效应的影响。结果：(1)不同浓度的5-FU处理以后,人结肠癌SW480细胞活性明显受到抑制,显时间和剂量依赖性,其半数抑制浓度IC50为(1.09±0.18)pg/mL。(2)经5-FU作用后,透射电子显微镜观察到CD133+细胞胞质内出现大量的自噬体、荧光显微镜显示细胞胞浆内出现黄绿色的致密斑点状结构、LC3-Ⅱ蛋白表达水平明显升高。(3)联合给予5-FU及3-MA处理48h,相比较单独给予5-FU组,CD133+细胞的细胞周期发生显著改变,Go/G1及G2/M期细胞比例显著下降,S期细胞比例增加(P<0.05),细胞活性由(81.8±4.6)%下降到(56.3±5.5)%(P<0.05),克隆形成率由(81.1±3.4)%下降(64.4±4.8)%(P<0.05),侵袭能力没有明显改变。结论：(1)5-FU可诱导结肠癌CD133+细胞发生自噬。(2)在5-FU处理的CD133+细胞中,自噬与结肠癌CD133+细胞的增殖有密切关系,但与侵袭能力没有明显的关系,自噬可能起到自我保护机制,自噬的抑制能够增强5-FU对结肠癌CD133+细胞的细胞毒效应。
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