蒙古马是世界上最古老的马品种之一,是我国优秀的马种资源。具有耐寒耐旱、耐粗饲、适应能力强等特征。此外,马匹关节和肌腱的解剖学、生理学以及损伤性质与人类高度相似,因此马是用于研究软骨损伤或退化细胞疗法的传统动物模型之一。诱导多能干细胞（Induced pluripotent stem cells,iPSCs）是将特定的转录因子导入体细胞重编程而获得的类似胚胎干细胞的一类细胞。iPSCs可以来源于任意体细胞,能够自我更新并分化为所有类型体细胞,因此在生物医学上可以用于建立疾病模型,以研究疾病的发生、药物检测以及疾病治疗,而在农业方面,它还可以用于研发转基因动物或者保护优秀遗传资源。但迄今为止,尽管有许多团队尝试建立马的iPSCs,但仍没有真正的马iPSCs的报道,在国内外均没有关于蒙古马iPS细胞的研究。因此,为了建立蒙古马诱导多能干细胞系,在本研究中,我们采用多顺反子慢病毒载体,将OCT4、SOX2、KLF4和c-MYC四个外源基因导入至蒙古马胚胎成纤维细胞中进行重编程。为后续进一步建立蒙古马生物学及医学细胞模型奠定基础。我们的实验结果如下:1.通过消化法分离培养了蒙古马34天胚胎成纤维细胞和小鼠13.5天胚胎成纤维细胞。两种细胞形态都符合成纤维细胞形态特征,能够正常消化传代,并且经过冻存、复苏后能够正常增殖且形态无异常。可以为后续研究提供重编程供体细胞及马iPSCs的饲养层。2.为了优化多顺反子慢病毒包装体系,我们使用脂质体3000和脂质体LTX两种转染试剂转染293T细胞,并比较了编码绿色荧光蛋白基因的慢病毒质粒的转染效率及包装病毒感染细胞的能力。最终显示,脂质体3000在病毒质粒的转染效率和包装病毒颗粒对细胞的感染能力方面都显示出较好的效果,分别为79.4±6.3%和74±3.6%。3.通过感染编码Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc基因的多顺反子慢病毒,我们成功获得了蒙古马iPS样细胞（E-iPS）:⑴蒙古马iPS样细胞显示出清晰的边缘、呈细胞集落生长;⑵对蒙古马iPS样细胞进行碱性磷酸酶染色,结果呈阳性,表明其具有多能性;⑶提取蒙古马iPS样细胞RNA,实时荧光定量PCR方法检测蒙古马iPS样细胞多能性相关基因的m RNA表达水平,结果显示,蒙古马iPS样细胞高表达Oct4、Sox2、Nanog、Bmp4、Rex1等5个多能性相关基因;⑷对获得的蒙古马iPS样细胞进行免疫荧光染色实验,结果显示蒙古马iPS样细胞表达多能性标记Oct4、Sox2、Nanog、Lin28、SSEA-1以及SSEA-4;⑸将蒙古马iPS细胞培养液中成分2i、LIF及BFGF撤去后观察其形态变化。结果显示,培养液撤去2i和BFGF时,E-iPS失去克隆形态,表明蒙古马iPS细胞可能通过BFGF途径来维持多能性。