VEGI及其相关因子在糖尿病视网膜病变发病机制中的作用研究

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目的:探讨血管内皮生长抑制因子(vascular endothelial growth inhibitor, VEGI)及其相关因子血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF).肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α).白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)在糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)发病机制中的作用。方法:70只6周龄雄性Wistar大鼠,随机分为空白对照组(CON组)10只,DM组60只。通过腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立DM大鼠模型。按照病程将DM组分为1月组(D1组)、3月组(D3组)及6月组(D6组),每组各20只。分别取CON组、D1组、D3组及D6组大鼠的血清、玻璃体及眼球组织。酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测VEGI.VEGF.TNF-α和IL-1p在血清及玻璃体中的浓度;石蜡切片免疫组织化学染色法(Immunohistochemistry-Paraffin section,IHC-P)检测各因子在视网膜组织中的表达;Western Blot检测视网膜组织中VEGI.VEGF及血管内皮生长因子受体-2(vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR-2)的表达;病理切片苏木素-伊红(hematoxylin eosin,HE)染色评价各组大鼠DR病变程度。比较分析CON组和DM组间大鼠血清、玻璃体及视网膜组织中VEGI.VEGF.TNF-α和IL-1p的表达情况。实验结果分析采用单因素方差分析、独立样本t检验和LSD检验,P<0.05差异有统计学意义。结果:血清中各因子的检测结果显示:CON组、D1、D3及D6组VEGI浓度分别为(92.09±2.05)、(118.36±8.30)、(85.90±7.51)、(78.90±4.88)ng/L,组间比较,差异有统计学意义(F=77.405,P<0.05);各组间VEGF浓度比较,差异无统计学意义(F=1.242,P>0.05);TNF-α也呈升高趋势,组间比较,差异有统计学意义(F=3.508,P<0.05);IL-1p在D1组开始即明显升高,组间比较,差异有统计学意义(F=15.416,P<0.05)。玻璃体中各因子的检测结果显示:CON组、D1、D3及D6组VEGI浓度分别为(91.50±8.18)、(67.03±6.74)、(47.44±4.92)、(46.01±4.62)ng/L,组间比较,差异有统计学意义(F=114.777,P<0.05);VEGF在D1组开始即明显升高,组间比较,差异有统计学意义(F=8.816,P<0.05);TNF-α和IL-1β也呈升高趋势,组间比较,差异有统计学意义(F=4.392、3.635,P<0.05)。IHC-P结果显示:D1、D3组大鼠视网膜组织中VEGI的表达均较CON组降低,差异有统计学意义(t=6.851、6.066,P<0.05),而D6组VEGI的表达与CON组比较,差异无统计学意义(t=1.401,P>0.05);D1、D3及D6组大鼠视网膜组织中VEGF和TNF-α的表达均较CON组显著升高,差异有统计学意义(tVEGF=-4.709.一16.406.-9.228,P<0.05;tTNF-α=-4.703、-6.583、-17.762,P<0.05);D1、D6组大鼠视网膜IL-1p的表达均较CON组显著升高,差异有统计学意义(t=-4.108、-3.495,P<0.05),但D3组IL-1p的表达与CON组比较,差异无统计学意义(t=-0.997,P>0.05)。Western Blot结果显示:D1组大鼠视网膜组织中VEGI的浓度较CON组明显下降,D3组VEGI浓度较D1组逐渐升高,D6组VEGI浓度基本恢复正常,与CON组比较差异无统计学意义;DM组大鼠视网膜组织中VEGF和VEGFR-2浓度均较CON组显著升高,与IHC-P结果相符。HE染色结果显示:CON组与D1组大鼠视网膜组织结构基本正常;D3组大鼠视网膜组织水肿,细胞排列紊乱;D6组视网膜组织明显水肿,神经节细胞核染色加深,内丛状层可见增生的毛细血管,内核层细胞排列紊乱、水肿,可见空泡样结构,视网膜各层结构不清晰。结论:VEGI作为一种血管内皮负性调控因子,与VEGF、TNF-a及IL-1β等因子协同参与了DR的发生发展,可能在DR发病机制中发挥较为重要的作用。
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