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目的:研究不同浓度与不同时间条件下国产吲哚菁绿前囊膜染色剂对活体兔角膜内皮细胞活性的影响。方法:选择健康科研用兔18只(36眼),无眼疾,体重2.8～3.0kg,雌雄不拘。由大连医科大学实验动物学部提供。随机分为4组,即分别为A组2.5毫克/毫升、B组5毫克/毫升、C组7.5毫克/毫升的国产吲哚菁绿溶液组,D组为平衡盐液对照组。其中A、B、C三组溶液配制方法为分别将12.5毫克、25毫克、37.5毫克的国产吲哚菁绿冻干粉末溶解于0.5毫升灭菌注射用水中,将该混合溶液摇晃均匀约5分钟,待溶液均匀绿色无可见颗粒后,分别加入4.5毫升平衡盐液稀释吲哚菁绿溶液浓度即得到2.5毫克/毫升、5毫克/毫升、7.5毫克/毫升的国产吲哚菁绿溶液。D组为按照注射用水与平衡盐液比例1:9配置与试验组吲哚菁绿溶液相同渗透压的平衡盐液做对照液组,四组溶液渗透压经测定接近于房水渗透压。每组9眼,每组分3亚组分别给予上述溶液作用30秒、60秒、90秒。动物模型具体制备方法为各组兔全身麻醉后,将其俯卧固定于手术台上,开睑器开睑,固定眼球。选择角巩膜缘位置,前房穿刺刀在颞上方角巩膜缘穿刺前房,再用27号钝针头经角巩膜缘紧贴前囊中央依据各组要求注入约0.3毫升新鲜配制的不同浓度吲哚菁绿溶液或对照液平衡盐液,操作过程中注意保护角膜内皮。待指定时间30秒、60秒、90秒后,做辅助侧切口,前房立即注入粘弹剂玻璃酸钠维持前房、保护角膜内皮细胞,沿兔眼角膜缘用显微剪小心取下角膜。将取下的角膜用包裹液立在载玻片上,迅速移入-20℃AO低温恒冷切片箱,待速冷成型后,每只角膜在中央区切成8μm的角膜冰冻切片6张,放入新鲜配置的NADH,LDH孵育液各2张进行孵育,另外2张切片分别作对照投入未加底物的2种酶孵育液内,保温箱中37℃孵育30分钟。乳酸脱氢酶(LDH)与还原型辅酶I(NADH)二种酶存在于组织细胞内,利用酶的组织化学染色方法测定组织细胞内乳酸脱氢酶(LDH)与还原型辅酶I(NADH)的酶活性改变。剩余部分角膜投入10%福尔马林溶液固定,按常规脱水、石蜡包埋、切片、HE染色步骤制作组织学切片,厚度为5μm,显微镜下观察。数据的处理可取各个不同处理组4张酶活性染色的切片,显微固像分析仪下随机取酶反应带上6点,测定LDH、NADH二组酶存在,酶活性以平均累积光密度值表示,采用SPSS11.0软件进行方差分析,并比较不同浓度国产吲哚菁绿溶液组内3个时间段与对照组3个时间段之间兔角膜内皮细胞酶活性的差异,P<0.05则差异具有显著性意义。在有显著性统计学意义实验组内进行酶活性与时间关联性统计学分析。结果:LDH、NADH活性在A组、B组与D组比较差异均无显著性意义(P>0.05),而C组在30s、60s、90s LDH光密度值分别为186.12±12.12A、169.97±11.14A、161.82±17.91A,NADH光密度值分别为178.86±12.67A、165.39±18.79A、158.81±17.48A,LDH、NADH活性在C组与A组、B组、D组比较差异均有显著性意义(P<0.05)。C组组内,酶的活性与药物接触角膜时间呈线性关系,负相关r=-0.45。(P<0.05)。结论:本研究结果显示0.75%国产吲哚菁绿溶液在90秒内即可对兔角膜内皮细胞产生毒性作用,并且毒性大小取决于该浓度下的作用时间,时间长则毒性作用加强,呈现一定的相关性。0.25%与0.5%的国产吲哚菁绿溶液在90秒内对兔角膜内皮细胞无毒性。因此,在眼外科手术中使用0.25%与0.5%的国产吲哚菁绿染色剂在90秒内染色眼内组织时,可能不影响人角膜内皮细胞活性。在保证晶状体前囊膜染色效果的同时,推荐使用低于0.5%国产吲哚菁绿溶液更为安全、可靠。