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海马是一种硬骨鱼,因其特殊的药用成分而闻名。海马是中国最著名的中药材料之一,因其具有抗炎、抗氧化、抗衰老、抗疲劳等多种生物活性而被研究。在外在物质入侵,如细菌和病毒进入身体,炎症是一种保护机制。然而,炎症反应的延长或解除可能导致多种疾病(炎症性肠病、关节炎、哮喘、阿尔茨海默症、帕金森病和糖尿病等)。本研究旨在讨论海马蛋白提取物的抗炎作用。采用水提取法提取蛋白,正交试验优化最佳提取条件,再利用透析,超滤、SDS-PAGE电泳从中分离出活性蛋白组分。将分离得到的活性蛋白利用MTT法、Griess法和建立体外抗炎活性模型进行抗炎活性测试,采用ELISA法和实时荧光定量PCR法检测海马活性蛋白对细胞分泌炎症因子的影响。本实验采用水提取法提取蛋白,正交试验优化海马蛋白提取浓度,最佳提取条件为提取时间30h、盐浓度为1.5moL、料液比为1:15,提取蛋白浓度为49.3mg/mL。采用透析除盐,SDS-PAGE电泳、超滤方法,从中分离出小于10KD组分、10KD～30KD组分和大于30KD分子量的蛋白组分。对分离的活性蛋白各超滤组分进行抗炎活性测试:采用MTT法对海马各超滤组分蛋白进行小鼠RAW264.7巨噬细胞毒活性实验,实验结果表明:在相同浓度下,小于10KD海马蛋白组分对细胞毒活性有较弱的影响,10～30KD海马蛋白组分对细胞毒活性无影响,大于30KD海马蛋白组分对细胞有较大的影响。采用Griess法对各超滤组分蛋白作用小鼠RAW264.7巨噬细胞NO含量的影响实验,实验结果表明:小于10KD与10～30KD海马活性蛋白组分均有抑制RAW264.7巨噬细胞NO含量,证明有抗炎效果,10～30KD海马活性蛋白抑制RAW264.7巨噬细胞分泌NO含量最强。而大于30KD海马蛋白组分无明显抑制RAW264.7巨噬细胞分泌NO的含量。通过ELISA和qRT-PCR方法分别检测炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)在mRNA和蛋白水平的含量。实验结果表明:与LPS组相比,10～30KD海马活性蛋白(12.5、25、50μg/mL)显著下调了 LPS诱导的TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达水平。10～30KD海马活性蛋白组分明显抑制脂多糖诱导的一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)蛋白的表达水平。结果表明10～30KD分子量的海马活性蛋白对RAW264.7巨噬细胞炎性损伤具有保护作用。本论文的研究拓展了传统中药海马的药效成分研究,并对海马治疗RAW264.7巨噬细胞炎性损伤的保护作用及机制研究提供前期指导。