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参七抗癌散为武汉市科德中医院的医院制剂,其处方源于张德忠教授祖传秘方,由西洋参、三七、白花蛇舌草等十味中药组方,具有益气活血、软坚散结、解毒止痛之功效。张德忠老中医将该经验方剂临床用于肿瘤患者40余年,治疗病例数以千计,能改善患者症状,控制肿瘤发展,减轻病人痛苦,提高生存质量,受到广大患者欢迎。本论文在参七抗癌散临床疗效的基础上,对其抗癌有效物质进行了研究,旨在诠释该医院制剂的药效物质基础,为其临床疗效提供科学依据。系统查阅了参七抗癌散组方各单味药的相关文献资料,对方中各药的主治功效、药理作用和化学成分进行检索,并对该中药复方进行了方解。同时大量查阅了有关中药复方抗肿瘤研究和中药复方物质基础研究的文献资料,学习他人的研究思路,借鉴别人的研究方法。在查阅文献资料基础上,完成本篇论文的综述,为论文设计思路和课题研究提供了参考依据。将参七抗癌散组方中药视为整体,采用现代超临界CO2萃取技术和传统溶剂萃取法对其化学物质进行了提取分离,分离为超临界CO2萃取物A、总多糖B、石油醚萃取物C、氯仿萃取物D、乙酸乙酯萃取物E、正丁醇萃取物F和水溶性物质G等7个化学物质部位;构买了肺腺癌A549细胞模型,通过MTT法对上述不同化学物质部位进行了抗癌活性筛选。结果表明,氯仿萃取物质部位具有显著抗癌活性,其他物质部位抗癌活性不甚明显,因此确定氯仿萃取物质部位为该中药复方的主要抗癌有效物质部位。采用HPLC-MS现代色谱技术,对氯仿萃取物质部位的化学成分进行分析,鉴定了其中8个化合物,分别为3-pyridine carboxylic acid,barbatin C,asperulosidic acid,deacetylasperuloside,2-cyclohexene-1-ketone,scutebarbatine F,barbatine D and scutebarbatine G。通过文献检索,上述化合物对多种癌细胞均有生物活性。采用硅胶柱色谱和制备型高效液相色谱的分离技术,从参七抗癌散有效物质部位分离出8种单体成分,通过1h-nmr、13c-nmr、ms等现代波谱综合分析方法,鉴定了其中的5个化合物,分别为柴胡次苷d(prosaikogenind)、柴胡次苷f(prosaikogeninf)、β-谷甾醇、ss-6(3β,16β,23-三羟基-13,28-环氧乌苏-11-烯-3-o-β-d-吡喃葡萄糖苷)、熊果酸甲酯。以a549细胞为授试对象,对上述化合物进行抗癌活性筛选研究,其ic50值分别为65.4、57.2、58.9、4.9、88.4μg/ml。表明各化合物均具有不同程度的抗癌活性,其中化合物ss-6(3β,16β,23-三羟基-13,28-环氧乌苏-11-烯-3-o-β-d-吡喃葡萄糖苷)的抗癌活性尤其显著。在确定参七抗癌散组方的抗癌有效物质部位及其有效成分的基础上,通过mtt法测定细胞活力、荧光染色法测定细胞形态、流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡变化、蛋白活力测定、免疫印迹实验等方法,探讨了抗癌有效物质的作用机理。研究结果表明,氯仿萃取物对a549细胞增殖具有显著抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;人肺腺癌a549细胞形态发生明显变化,呈现细胞凋亡典型特征,且随着药物浓度增加凋亡率升高;westernblot检测了抗癌有效物质对蛋白表达的影响,可激活caspase-3、-8、-9,促凋亡基因bax表达增强,抑凋亡基因bcl-2表达下调,bax/bcl-2的比值明显上升。故推测参七抗癌散有效物质通过死亡受体途径和线粒体途径诱导a549肺癌细胞凋亡,并与其上调促凋亡基因bax和下调抑凋亡基因bcl-2表达相关。通过westernblot试验方法探讨了化合物ss-6(3β,16β,23-三羟基-13,28-环氧乌苏-11-烯-3-o-β-d-吡喃葡萄糖苷)抗人肺腺癌a549细胞的作用机制。检测了pi3k/akt/mtor通路,自噬作为细胞程序性死亡的另一种方式,我们同时也检测了自噬相关的蛋白表达情况,结果表明化合物ss-6可明显抑制a549细胞增殖,呈剂量依赖关系,可下调bcl-2的表达,上调bax的表达;通过上调bax/bcl-2激活caspase蛋白家族,促使PARP剪切,因而推测经线粒体途径诱导A549细胞凋亡。通过免疫印迹法检测PI3K/AKT/mTOR信号通路和自噬相关蛋白的表达,结果显示LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、beclinl、Atg5、Atg7、Atg12蛋白表达水平均明显增高,说明该化合物对A549细胞PI3K/AKT/mTOR信号途径及其下游靶蛋白磷酸化具有抑制作用,从而表明参七抗癌散有效成分的抗癌作用机制是抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路,诱导细胞自噬和凋亡。本学位论文通过学科交叉的研究方法,筛选了参七抗癌散医院制剂的有效物质部位,分析鉴定了有效物质部位的主要抗癌活性成分,探讨其抗癌有效物质的作用机理,从而诠释了该医院制剂的药效物质基础,为其临床疗效提供了科学依据。