【摘 要】
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利用花药进行组织培养,可以快速缩短烟草育种时间、提高育种效率,而利用叶片进行组织培养,可以进行扩繁。本研究以HKDN高钾品系杂交F1代的花药和叶片为外植体,通过花药直接诱导胚状体、花药及叶片先诱导愈伤组织再分化出芽两种途径,建立胚状体和愈伤组织的组培体系,以期为遗传转化和细胞水平上筛选抗病突变体奠定技术基础,主要结果如下:1.花药胚状体的诱导（1）基本培养基:花药培养的最适基本培养基为H培养基,胚
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利用花药进行组织培养,可以快速缩短烟草育种时间、提高育种效率,而利用叶片进行组织培养,可以进行扩繁。本研究以HKDN高钾品系杂交F1代的花药和叶片为外植体,通过花药直接诱导胚状体、花药及叶片先诱导愈伤组织再分化出芽两种途径,建立胚状体和愈伤组织的组培体系,以期为遗传转化和细胞水平上筛选抗病突变体奠定技术基础,主要结果如下:1.花药胚状体的诱导（1）基本培养基:花药培养的最适基本培养基为H培养基,胚状体诱导率最高为19.2%,长势较好。（2）基因型:不同材料的F1代,其胚状体诱导率不同,其中以H11（♀HKDN-2×♂Coker371）的诱导率最高,长势最好。（3）水解酪蛋白:随着添加的水解酪蛋白浓度增加,各材料胚状体诱导率降低,说明水解酪蛋白不利于诱导率的提高;但在继代培养中添加0.1g/L的水解酪蛋白,可以促进胚状体的生长。（4）接种密度:材料花药在每皿接种20和25颗时诱导率较好,且胚状体长势较好,为了节约试验成本,以每皿25颗为各材料最佳接种密度。（5）干化处理:干化处理时间越长,各材料花药诱导率越低,故材料花药不适合采用干化处理。（6）多因素交互作用:在激素、基因型以及暗培养天数的交互作用下,胚状体诱导最优组合是H11+0.2mg/L2,4-D+暗培养7d,诱导率为70%,长势也最佳。2.花药和叶片愈伤组织的诱导及分化（1）愈伤组织的诱导:0.4mg/L2,4-D+0.3mg/L6-BA+暗培养9d为花药诱导产生愈伤组织的最佳培养基;叶片诱导愈伤组织时,叶片诱导愈伤组织最佳培养基为MS培养基,即不添加任何激素条件下,愈伤组织诱导率高且结构疏松。（2）愈伤组织分化芽:愈伤组织分化出芽的最适培养基为MS+0.2mg/LNAA+0.2mg/L6-BA,出芽率达到65%,且幼芽长势好,颜色绿。（3）芽生根:幼芽生根的最适培养基为MS+0.1mg/LIAA,此时生根率达到100%,均根长为6.8cm。综上所述,高钾烤烟品系F1代花药诱导胚状体的最佳培养基是H+0.2mg/L2,4-D,最适培养条件为暗培养7d,接种密度25颗/皿,同时在后续培养中可以添加0.1g/L的水解酪蛋白促进胚状体的快繁;花药和叶片诱导愈伤组织的最佳培养基分别为H+0.4mg/L2,4-D+0.3mg/L6-BA和MS+不添加激素;愈伤组织分化最佳培养基为MS+0.2mg/LNAA+0.2mg/L6-BA;芽生根最适培养基为MS+0.1mg/L IAA。
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