【摘 要】
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本文以十通阀和捕集柱接口形式,构建了弱阴离子交换／反相(WAX/RP)二维液相色谱分离系统并将其用于对蛋白质组的研究。通过将第一维离子交换色谱分析中前部集中洗脱出的弱保留
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本文以十通阀和捕集柱接口形式,构建了弱阴离子交换／反相(WAX/RP)二维液相色谱分离系统并将其用于对蛋白质组的研究。通过将第一维离子交换色谱分析中前部集中洗脱出的弱保留组分收集后单独分析,其余的组分进一步进行二维分离,有效避免了第二维色谱柱对第一维集中流出组分的超载问题,提高了系统的整体分离能力。同时利用该系统偶联激光诱导荧光检测器(LIFD)研究了由4-氟-7-硝基-2,1,3-苯并氧杂恶二唑(NBD-F)衍生的肿瘤组织酶解产物,与UV检测相比,偶联LIFD的二维液相色谱系统多检测到200多个峰,初步实现了高效分离与高灵敏检测的有机结合。不同蛋白质的分子结构和丰度差别极大,因此对荧光衍生化试剂提出了更高的要求。本文研究了苝、4-硝基-1,8-萘酐和N-正丁基取代-1,8-萘酰亚胺分别对脂肪胺、氨基酸和含醛基化合物的衍生化反应,并用HPLC/激光诱导荧光检测器分离检测了上述衍生化产物,结果表明4-硝基-1,8-萘酐可用于对脂肪胺和氨基酸的衍生化检测。而4-(氨乙基)胺基-N-正丁基-1,8-萘酰亚胺可用于用于醛类化合物的衍生,HPLC-LIF法对戊二醛的检出限达到10-10mol/L,该法为含有醛基的蛋白质及糖蛋白的选择性检测提供了一条可能的途径。
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