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背景和目的肺癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,已经成为肿瘤死亡的主要原因,非小细胞肺癌(NSCLC)约占肺癌中发病率的85%,由于缺乏早期肺癌诊断技术,多数患者在诊断时已处于中晚期,失去手术治疗的最佳机会。晚期肺癌治疗一般采取多学科综合治疗,其中化疗是其主要的治疗手段。在临床治疗中,以铂类为基础联合第三代化疗新药的方案成为晚期NSCLC治疗的标准化疗方案,但其化疗的有效率仅为30%~40%,绝大数患者仍难免于肿瘤局部复发及远端转移,5年总生存率仅为16.1%。肿瘤细胞对化疗药物产生抗性是影响化疗疗效的主要原因。早期研究发现导致顺铂耐药的机制包括肿瘤细胞内药物浓度降低,药物在细胞内被降解代谢及DNA损伤修复增强,凋亡信号转导通路的改变等。近年来,肿瘤微环境越来越受到研究者的重视,研究发现肿瘤微环境中多种细胞因子或趋化因子与肿瘤细胞化疗耐药相关。单核细胞趋化因子(MCP-1,也称CCL2)是肿瘤微环境中存在比较广泛的一类趋化因子,主要招募单核/巨噬细胞到肿瘤部位,与多种肿瘤的侵袭转移以及不良预后密切相关,但其在肿瘤细胞耐药中的作用及其机制尚不清楚。因此,本研究的主要任务是探究CCL2在NSCLC顺铂耐药中的作用及其可能的调控机制,为逆转NSCLC耐药提供理论依据,为NSCLC耐药的治疗提供新的靶点。方法收集接受顺铂治疗的非小细胞肺癌患者血清,其中顺铂敏感及顺铂耐药的患者各15例。多因子试剂盒和ELISA筛选出差异明显的趋化因子;收取2013年至2015年间在郑州大学第一附属医院就诊的非小细胞肺癌患者手术切除标本81例,荧光定量PCR检测NSCLC癌组织、A549细胞、A549顺铂耐药(A549/Cis)细胞中CCL2基因表达水平以及沉默CCL2表达后A549/Cis细胞干性相关基因Bim-1、c-Myc、Sox2、Oct-4表达水平;细胞毒性实验(CCK-8)和细胞成球实验检测抑制CCL2表达后,A549/Cis细胞干性以及耐药性的改变;密度梯度离心法获得的健康人外周血单个核细胞,采用磁珠分选技术纯化出CD14+单核细胞,用A549细胞及A549/Cis细胞培养上清处理CD14+单核细胞,流式细胞技术检测CD163+M2巨噬细胞的比例;Transwell实验、血管形成实验和CCK-8实验分别检测M2巨噬细胞对A549迁移、血管生成以及顺铂耐药性的影响;PCR Array筛选出调控CCL2表达的转录因子,小干扰RNA验证其对CCL2的调控作用以及对A549/Cis顺铂耐药性的影响。结果1.与顺铂治疗敏感患者相比,耐药患者血清中CCL2分泌水平较高。2.A549/Cis细胞中CCL2表达水平高于A549细胞;NSCLC癌组织中CCL2的表达水平与患者分期呈正相关,与预后呈负相关;沉默CCL2表达后A549/Cis细胞干性相关基因Bim-1、c-Myc、Sox2、Oct-4表达水平降低。3.CCL2能够增强NSCLC干性,增强NSCLC对顺铂耐受性。4.与A549细胞培养上清处理后的CD14+单核细胞相比,A549/Cis细胞培养上清处理后,CD163+M2巨噬细胞的比例明显升高。5.A549/Cis极化的CD163+M2巨噬细胞能够促进A549细胞的迁移及血管形成,增强A549细胞对顺铂的耐受性。6.与A549细胞相比,A549/Cis细胞中FOS、EGR1、STAT5A表达水平升高,MYF5、HAND2、HNF4A表达水平下降。7.沉默c-Fos后,A549/Cis细胞中CCL2基因表达水平降低,顺铂对A549/Cis细胞的杀伤能力增强。结论趋化因子CCL2通过促进肿瘤细胞干性获得以及CD14+单核细胞到肿瘤部位的招募和极化,增强NSCLC对顺铂治疗的耐受性。NSCLC中c-Fos调控CCL2的转录及表达,沉默c-Fos表达后降低CCL2 m RNA表达水平及蛋白分泌水平能够逆转NSCLC对顺铂产生的抗性,靶向c-Fos降低CCL2的表达可能为逆转NSCLC顺铂耐药提供新的治疗手段。