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随着毒理学研究的不断深入,合成色素和雌激素效应物的毒性作用己逐渐被人们认识。然而,食品中合成色素违法添加和雌激素效应物超标的食品安全事件不断出现,引起了研究者和消费者的共同关注。目前,我国在食品安全监管方面缺乏简便、快速、灵敏、准确检测这些合成色素和雌激素效应物的方法。基于此,本课题采用免疫学原理,在制备特异性单克隆抗体的基础上,建立起赤藓红、柠檬黄、碱性橙Ⅱ、对氨基偶氮苯、辛基酚和邻苯二甲酸二丁酯六种物质的ELISA检测方法,主要研究内容如下：(1)通过将赤藓红脱钠后与6-氨基己酸反应合成赤藓红的半抗原,并合成赤藓红的人工完全抗原,免疫老鼠得到针对赤藓红的阳性脾细胞,进行细胞融合并获得赤藓红的单克隆细胞株,通过体内诱生法制备腹水单抗,从而建立赤藓红的酶联免疫检测方法,赤藓红单抗的IC50为3.02ng/mL, LOD检测限(IC1o)为0.75ng/mL,线性范围为1.27ng/mL-8.49ng/mL。将赤藓红的ELISA检测方法成功应用到葡萄汁饮料的添加回收实验当中,其批内批间测定的总回收率为92.06%-106.20%,总的变异系数为4.38%-13.93%。(2)研究了影响制备高特异性高灵敏柠檬黄抗体的半抗原因素机理,并合成了相关的半抗原,最终免疫筛选出一株超高灵敏的柠檬黄单克隆抗体1F3,其IC50值达到了0.11ng/mL。并用建立的ELISA方法对橙汁饮料进行了添加回收实验,其批内的回收率为84.12%-109.70%,变异系数为5.95%-11.26%；批间的回收率为73.38%-93.43%,变异系数为5.90%-12.35%。并且还将该ELISA方法成功地应用到了真实未知的阳性碳酸饮料样品的检测,并评价了其精确性,其检出浓度值为13456.73ng/mL。(3)通过对碱性橙Ⅱ的化学结构进行分析,设计合成出带有4个C原子的羧基碳链的碱性橙类似物,并解决了碱性橙分子本身所具有的氨基的保护间题,制备出高特异性的碱性橙单克隆抗体5E12,其最优IC5o为2.13ng/mL,检测限LOD为0.50ng/mL,线性范围在0.81-6.93ng/mL。并用建立的ELISA检测方法对市售的小黄鱼进行碱性橙添加回收测定,其总回收率为75.52%-112.95%,总变异系数为4.99%-7.96%,证明该方法灵敏稳定可靠。(4)以对氨基苯甲酸和间苯二胺进行重氮化反应,制备出了对氨基偶氮苯的半抗原,并免疫老鼠和进行细胞融合,制备筛选出对氨基偶氮苯的单克隆抗体1G3,其最优IC50达到了44.11ng/mL,检测限LOD (IC10)为5.09ng/mL,且其对碱性橙等其它色素均没有交叉反应。用1G3抗体的ELISA方法对豆腐干进行了实际样品添加回收实验,其总回收率为76.17%-88.26%,总变异系数为3.75%-13.30%,可用于食品中对氨基偶氮苯非法添加物的快速灵敏检测。(5)在前人研究的基础上,以壬二酸和壬二酸二甲酯为原料,通过6步化学反应来合成辛基酚的类似物壬酸苯酚NPA,制备出了具有更强特异性的只针对辛基酚的单克隆抗体3C7,其IC50为75.83ng/mL,检测限LOD (IC10)为6.55ng/mL,并且该单抗对壬基酚等其余酚类物质无交叉反应。用该单抗建立的ELISA检测方法,对太湖水进行了添加回收实验,其总体回收率为79.53%-96.47%,变异系数为4.79%-12.31%。(6)针对目前酞酸酯免疫检测方法中邻苯二甲酸二丁酯DBP的抗体灵敏度不高的间题,设计合成了以4-氨基邻苯二甲酸二丁酯DBAP作为半抗原,进一步制备筛选出针对邻苯二甲酸二丁酯DBP的高特异性单克隆抗体3B7,其IC50达到了33.94ng/mL,检测限LOD为3.31ng/mL,且对其余酞酸酯无交叉反应。将建立的DBP单抗ELISA检测方法用于酒类的添加回收实验中,其对市售的白酒实际样品的回收率在80.3%-95.1%之间。