【摘 要】
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目的:探究klotho(克老素,KL)通过何种机制来改善地塞米松(dexamethason,DEX)对MC3T3-E1成骨细胞的抑制作用。方法:首先采用倒置荧光显微镜观察含Klotho基因(Ad-KL)重组腺病毒和含绿色荧光蛋白基因(Ad-GFP)的重组腺病毒在MC3T3-E1细胞中的转染效率,并用Western blot检测KL蛋白表达水平。CCK-8检测各组细胞的存活率,流式细胞术和Weste
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目的:探究klotho(克老素,KL)通过何种机制来改善地塞米松(dexamethason,DEX)对MC3T3-E1成骨细胞的抑制作用。方法:首先采用倒置荧光显微镜观察含Klotho基因(Ad-KL)重组腺病毒和含绿色荧光蛋白基因(Ad-GFP)的重组腺病毒在MC3T3-E1细胞中的转染效率,并用Western blot检测KL蛋白表达水平。CCK-8检测各组细胞的存活率,流式细胞术和Western blot分析NF-кB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)组跟各组间的关系;通过Western blot和qPCR对各组凋亡蛋白和NF-κκB通路相关蛋白的表达情况进行检测;激光共聚焦检测IκB蛋白表达情况及NF-кB p65核移位。结果:MC3T3-E1细胞成功被Ad-KL转染,且KL蛋白可以在细胞中高效表达。通过CCK-8及Western blot发现DEX诱导成骨细胞凋亡且cleaved caspase-3蛋白表达明显增加,而KL预处理后凋亡细胞数量较前明显减少且cleaved caspase-3蛋白表达下降。PDTC可使DEX诱导的凋亡细胞数减少并减弱DEX诱导的caspase-3增加。KL能够通过减少DEX诱导的IκB降解,NF-кB p65的核移位和p65的磷酸化来降低DEX诱导的MC3T3-E1细胞凋亡并同时减少caspase-3的表达。结论:KL能通过抑制NF-κB途径来改善DEX诱导的MC3T3-E1细胞凋亡。除此之外,KL还有可能通过其他信号通路来改善DEX诱导的MC3T3-E1细胞凋亡,具体如何尚需要进一步研究。本研究结果表明,KL有可能是未来防治糖皮质激素性骨质疏松(GIOP)的新靶点。
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