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全反式维甲酸（all trans retinoic acid，ATRA）作为诱导分化剂的代表，已广泛应用于急性早幼粒性细胞白血病的临床治疗，其能诱导肿瘤细胞向正常或接近正常细胞方向分化，从而达到治愈肿瘤的目的，但同时也存在维甲酸综合征和耐药等不足。本实验室以ATRA为先导化合物，通过对其碳链末端极性基团进行结构修饰，合成了一系列全新的维甲酸衍生物，经过体外药效学筛选发现4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯（4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl retinate， ATPR）具有较强的诱导分化活性，有望开发成为一种新型的诱导分化剂。本研究以鼠淋巴母细胞瘤细胞株YAC-1和人套细胞淋巴瘤细胞株Jeko-1为研究对象，通过体外实验观察ATPR对淋巴瘤细胞分化的作用，并探讨其作用的可能机制。目的：观察新型维甲酸衍生物ATPR对淋巴瘤细胞分化的影响，并探讨其作用的可能机制。内容：1.观察ATPR对YAC-1和Jeko-1细胞的诱导分化作用。2.观察ATPR对YAC-1和Jeko-1细胞中维甲酸受体表达的影响。3.探讨PTEN/PI3K/Akt通路在ATPR诱导YAC-1和Jeko-1细胞分化过程中的作用。方法：1. ATPR诱导分化作用的观察：MTT法观察ATPR对YAC-1和Jeko-1细胞增殖的影响；倒置显微镜下观察ATPR对YAC-1和Jeko-1细胞形态的影响；NBT还原试验法分析YAC-1和Jeko-1细胞的功能分化程度；同时，以Jeko-1细胞为研究对象，采用流式细胞仪测定细胞周期的变化及特异性分化指标CD38的表达变化。2.维甲酸受体的检测：RT-PCR和Western Blot法检测ATPR对YAC-1和Jeko-1细胞维甲酸受体mRNA表达和蛋白水平的影响。3. PTEN/PI3K/Akt通路相关蛋白的检测：采用Western Blot法检测ATPR引起的YAC-1细胞中PTEN/PI3K/Akt和cyclinD蛋白水平的变化。采用RNA干扰技术靶向技术沉默Jeko-1细胞PTEN基因，6h后加入ATPR及ATRA作用72h后采用Western Blot法观察pAkt和cyclinD蛋白水平的变化。结果：1. ATPR对YAC-1和Jeko-1细胞有诱导分化作用：MTT结果显示，ATPR能抑制YAC-1和Jeko-1细胞增殖；显微镜下观察，ATPR可诱导YAC-1和Jeko-1细胞形态呈分化改变；NBT阳性细胞百分比显著升高；在Jeko-1细胞中，G0/G1期细胞比例上升，表面分化抗原CD38表达显著增加。2. ATPR通过和维甲酸受体结合发挥诱导分化的作用：ATPR引起YAC-1细胞中RARα的mRNA表达和蛋白水平升高，RARβ和RARγ mRNA表达和蛋白水平无明显变化；ATPR引起Jeko-1细胞中RARα和RARγ的mRNA表达和蛋白水平升高，而RARβ mRNA表达和蛋白水平无明显变化。3. ATPR通过调节PTEN/PI3K/Akt通路相关蛋白发挥诱导分化的作用：ATPR在YAC-1细胞中可诱导PTEN蛋白表达升高，并下调p-Akt和cyclinD的蛋白表达；在Jeko-1细胞中，靶向沉默PTEN基因6h后加入ATPR及ATRA作用72h发现，转染组、转染后加药组p-Akt和cyclinD蛋白表达量明显增高。结论：1. ATPR对YAC-1和Jeko-1细胞具有诱导分化作用。2. ATPR在YAC-1和Jeko-1细胞中通过和维甲酸受体结合，调节PTEN/PI3K/Akt通路发挥诱导分化的作用。