【摘 要】
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目的:探究hsa-miR-515-5p对喉鳞癌迁移和侵袭作用,以及靶向下游目的基因的相关调控机制。方法:使用Kaplan-Meire Plotter做hsa-miR-515-5p在喉鳞癌（Laryngeal Squamous Cell Carcinoma,LSCC）患者中的生存分析,RT-qPCR检测LSCC中hsa-miR-515-5p相对表达水平。在LSCC细胞系AMC-HN-8和FD-LSC
【基金项目】
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国家自然科学基金“Hsa＿circ＿0089466调控GPR183致ERK通路激活对喉鳞癌干细胞干性维持及化疗抵抗的作用与机制研究（编号:81872210）”,2019年01月至2022年12月；
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目的:探究hsa-miR-515-5p对喉鳞癌迁移和侵袭作用,以及靶向下游目的基因的相关调控机制。方法:使用Kaplan-Meire Plotter做hsa-miR-515-5p在喉鳞癌（Laryngeal Squamous Cell Carcinoma,LSCC）患者中的生存分析,RT-qPCR检测LSCC中hsa-miR-515-5p相对表达水平。在LSCC细胞系AMC-HN-8和FD-LSC-1中转染hsa-miR-515-5p模拟物和抑制物实现hsa-miR-515-5p的过表达和敲降。通过细胞划痕法、Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力。应用Targetscan、miRBase、Starbase（ENCORI）、miRDB、miRWalk、NCBI等数据库预测hsa-miR-515-5p下游靶基因。构建野生型、突变型和过表达转录因子叉头盒C1（Forkhead Box C1,FOXC1）重组质粒,利用双荧光素酶报告基因实验验证hsa-miR-515-5p与FOXC1直接靶向关系。进一步行细胞功能实验验证hsa-miR-515-5p与FOXC1对LSCC迁移、侵袭作用和调控机制。结果:Hsa-miR-515-5p在LSCC细胞系AMC-HN-8和FD-LSC-1中表达升高,其表达水平与患者预后呈负相关。细胞实验证明,在AMC-HN-8和FD-LSC-1细胞过表达hsa-miR-515-5p,可增强喉鳞癌细胞的迁移和侵袭能力。反之,抑制hsa-miR-515-5p表达可抑制喉鳞癌细胞的迁移和侵袭能力。双荧光素酶报告实验证明,hsa-miR-515-5p可直接靶向FOXC1的3’UTR区。此外,FOXC1在LSCC中表达下调,miR-515-5p通过靶向调节FOXC1对喉鳞癌细胞的迁移和侵袭发挥作用。结论:Hsa-miR-515-5p在喉鳞癌细胞中发挥促癌因子的作用。FOXC1作为miR-515-5p的下游靶标,在喉鳞癌细胞中显著低表达,抑制喉鳞癌细胞迁移和侵袭能力。因此,hsa-miR-515-5p和FOXC1有望成为喉鳞癌早期筛查、疾病诊断、肿瘤预后和靶向治疗的潜在生物标志物。
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