目的:研究甲基乙二醛对HK2细胞的损伤以及肌肽对HK2细胞的保护作用,并利用iTRAQ质谱分析进一步探求肌肽对MGO损伤的肾小管上皮细胞的保护机制,利用生物信息分析寻找MGO和肌肽可能参与的生物过程,为糖尿病肾病治疗的新靶点提供实验证据。方法:在本研究中,我们设计用肌肽干预MGO损伤的肾小管上皮细胞。实验分组为对照组、MGO组、肌肽组和MGO+肌肽组,每组设置三个生物学重复,培养48小时后进行一系列实验。CCK-8法检测MGO和肌肽对HK2细胞增殖能力的影响,细胞划痕实验检测MGO和肌肽对HK2细胞迁移能力的影响,TUNEL实验检测MGO和肌肽对HK2细胞凋亡的影响,蛋白质印迹法检测MGO和肌肽对HK2细胞凋亡的影响。此外,通过iTRAQ质谱技术分析差异蛋白的表达,利用生物信息分析寻找MGO和肌肽可能参与的生物过程,进一步探求肌肽对MGO损伤的肾小管上皮细胞的保护机制。结果:(1)CCK8实验检测显示,不同浓度(400、800、1200 μM)的MGO均抑制HK2细胞的增殖,最适宜抑制浓度为800 μM。肌肽可以拮抗MGO对HK2细胞的毒性作用,增强细胞活力,最大保护效应浓度为60mM。(2)TUNEL细胞凋亡实验表明,MGO促进HK2细胞凋亡,而肌肽可抑制MGO诱导的细胞调亡。(3)细胞划痕实验显示,MGO明显抑制HK2细胞的迁移能力,而加入肌肽后可增强其迁移能力。(4)蛋白免疫印迹显示,MGO使HK2细胞凋亡蛋白Caspase3、Bax表达上调,加入肌肽后其表达下调。(5)iTRAQ蛋白质谱分析MGO和肌肽可以显著改变HK2细胞的蛋白表达谱。结论:肌肽可保护甲基乙二醛诱导的HK2细胞损伤,iTRAQ蛋白质谱分析MGO和肌肽可以显著改变HK2细胞的蛋白表达谱。这些发现为MGO对肾近端小管细胞的影响提供了新的见解,有助于更好地了解肌肽保护糖尿病肾病的机制。