【摘 要】
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造血生长因子和转录因子对造血细胞的分化和发育起着决定性作用.该文选择了巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和新发现的造血相关基因(EDAG)作为研究造血调控分子机制的入门.J6-1
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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造血生长因子和转录因子对造血细胞的分化和发育起着决定性作用.该文选择了巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和新发现的造血相关基因(EDAG)作为研究造血调控分子机制的入门.J6-1细胞系是该室建立的人白血病细胞系,呈现霍奇金病(HD)细胞系的性质,也表现出明显的异质性.从J6-1细胞分离到膜结合因子(MAF-J6-1)和它的受体(MAF-J6-1-R).该实验室多年业的研究证明MAF-J6-1很可能是膜结合型的M-CSF,但尚未克隆其编码基因,缺乏直接证据.该研究拟克隆MAF-J6-1及其受体的编码基因并进行序列测定,从分子水平证实MAF-J6-1是否就是膜结合型的M-CSF.该实验采用RT-PCR方法从J6-1细胞克隆出M-CSF及其受体基因的编码区,结果表明J6-1细胞中存在着m-M-CSF和s-M-CSF两种mRNA转录本.该实验采用半定量RT-PCR技术对人白血病细胞系、正常人骨髓、培养的人胚肺细胞及脐血CD34<+>细胞中EDAG mRNA的表达水平进行了检测.结果显示,EDAG基因在K562、KG-1a、Jurket、Namava细胞系及脐血CD34<+>细胞中有较高的表达,在Raji、LCL、SMMC-7721细胞和正常人骨髓单个核细胞中次之,在U937细胞中表达较弱,而HL-60、NB4、J6-1细胞系和培养的人胚肺细胞均没有测出EDAG mRNA的表达.RNA干扰(RNAi)是利用具有同源性的双链RNA诱发序列特异的转录后基因沉默的现象,具有高效性和特异性,已成为基因功能研究的一种新方法.该研究中,RNA干扰试验结果显示在分别转染了针对EDAG基因的两个SiRNA体内转录合成质粒后,K562细胞内EDAG基因mRNA的表达水平明显下降,为对照组的68％和40％.
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