第一部分ErbB4在人类胆管癌QBC939细胞系中的表达目的:研究ErbB4受体在人胆管癌QBC939细胞系细胞中的表达情况。方法:体外培养人胆管癌QBC939细胞系细胞,免疫荧光法检测ErbB4在胆管癌细胞中的表达情况。结果:胆管癌QBC939细胞系中表达ErbB4蛋白。结论:人胆管癌QBC939细胞中表达人类第4表皮生长因子受体(ErBb4)。证明本课题组选用QBC939细胞系来进行后续体外实验的可行性。第二部分阻断ErbB4受体对胆管癌QBC939细胞系细胞的增殖、迁移及侵袭的影响目的:考察经AG1478特异性抑制剂阻断ErbB4受体对人胆管癌QBC939细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:分别加入终浓度为0μmol/L,1μmol/L,5μmol/L,10μmol/L,25μmol/L,50μmol/L,75μmol/L,100μmol/L的AG1478阻断胆管癌细胞ErbB4受体,使用CCK-8法测量各组胆管癌细胞增殖情况,并利用SPSS软件计算AG1478对人胆管癌QBC939细胞的半数抑制浓度(IC50值)。分别使用0μmol/L,25μmol/L,50μmol/L,75μmol/L AG1478阻断胆管癌细胞ErbB4受体,使用划痕实验检测各组胆管癌细胞迁移能力的变化。分别使用0μmol/L,25μmol/L,50μmol/L,75μmol/L浓度AG1478阻断胆管癌细胞ErbB4受体,使用Transwell小室法实验检测各组胆管癌细胞侵袭能力的变化。结果:AG1478以浓度依赖方式抑制QBC939细胞增殖,计算其IC50值为:49.14μmol/L。AG1478抑制ErbB4受体后,胆管癌QBC939细胞的迁移、侵袭能力减弱。结论:ErbB4抑制剂能在体外抑制人类胆管癌QBC939细胞增殖、迁移与侵袭。第三部分抑制ErbB4受体能下调iNOS表达目的:研究ErbB4受体实现其肿瘤生物学功能可能的涉及的分子机制。方法:使用50μmol/L浓度阻断ErbB4受体,使用免疫蛋白印迹法测量阻断前后细胞裂解液中iNOS含量,比较阻断胆管癌细胞ErbB4受体能否抑制iNOS表达。分别使用浓度0μmol/L,25μmol/L,50μmol/L,75μmol/L的AG1478阻断胆管癌细胞ErbB4受体,使用总一氧化氮检测试剂盒检测细胞培养液中NO含量变化。分别使用浓度0μmol/L,25μmol/L,50μmol/L,75μmol/L的AG1478阻断胆管癌细胞ErbB4受体,使用ELISA法检测细胞培养液中VEGF含量变化。结果:AG1478抑制ErbB4受体后,胆管癌QBC939细胞裂解液中iNOS含量减少。AG1478抑制ErbB4受体后,胆管癌QBC939细胞培养上清液中NO、VEGF含量减少,间接反映iNOS表达减少。结论:ErbB4抑制剂能在体外抑制人类胆管癌QBC939细胞i NOS表达,并引起其下游NO以及相关因子VEGF分泌减少。