南蛇藤中雷公藤红素的提取纯化工艺研究和长管红山茶化学成分研究

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目的:探究南蛇藤中雷公藤红素的最佳提取和纯化工艺;提取、分离长管红山茶中的化学成分。筛选有利尿活性的化合物。方法:以雷公藤红素含量为测定指标,单因素考察提取溶剂、溶剂倍量比、提取时间、提取次数及提取温度对含量的影响并确定正交设计实验因素水平范围,通过单因素和正交设计实验筛选得到南蛇藤中雷公藤红素的最佳提取工艺。设计对比四组柱层析纯化结果,对比传统提取拌样柱层析与药材粉碎后直接装柱分离雷公藤红素含量的变化。水回流提取长管红山茶叶,经正相硅胶,反相硅胶,凝胶色谱,半制备HPLC及HSCCC等分离手段进行长管红山茶叶中化学成分的分离,通过颜色、形态、比旋光度、紫外、NMR等物理化学手段进行分离化合物的结构鉴定。以健康成人血液为材料用红细胞裂解模型筛选UT-B抑制剂研究化合物的利尿活性。结果:南蛇藤中雷公藤红素的最佳提取工艺为提取溶剂石油醚乙酸乙酯1:1,溶剂倍量为10,提取时间为30 min,提取温度为30℃;纯化工艺研究中按照传统方法将药材粉碎提取拌样后柱层析分离效果没有直接用药材粉末上样柱层析分离效果好。以最优提取工艺所得南蛇藤粉末中雷公藤红素含量为1计,拌样后硅胶经甲醇洗脱所得雷公藤红素回收率为66.49%,硅胶经洗脱剂洗脱的回收率为39.84%,40目粉末直接硅胶柱层析回收率为126.45%,60目粉末直接硅胶柱层析回收率为70.61%,100目粉末直接硅胶柱层析回收率为48.87%,传统提取方法柱层析回收率仅为23.16%,以上仅比较了回收率,未比较纯度的差异,由于硅胶柱层析为粗分离,其纯度对进一步分离影响并不大,而回收率的差异较大;长管红山茶干燥叶10 kg,水回流提取得浸膏900 g,经一系列分离手段共分离得到20个化合物,鉴定20个,分别为对羟基肉桂酸(1),2,4,6-三羟基苯乙酮(2),槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷(3),槲皮素(4),2,4,6-三羟基苯乙酮-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(5),儿茶素(6),原儿茶酸(7),β-谷甾醇(8),5,7-二羟基色原酮(9),芦丁(10),3-O-甲基槲皮素(11),9-羟基-4-甲氧基补骨脂素(12),去甲丁香色原酮(13),柚皮素(14),山奈酚(15),(-)-表儿茶素(16),表儿茶素没食子酸酯(17),没食子酸(18),表没食子儿茶素没食子酸酯(19),杨梅素(20),其中9个黄酮类化合物,5个鞣质类化合物,4个酚酸类化合物,1个甾体类化合物,1个香豆素类化合物。化合物1、2、5、9、11、12和13共7个是首次从山茶科和山茶属中分离得到,以上20个均是首次从长管红山茶植物中分离得到。以健康成人血液为实验材料用红细胞裂解模型筛选UT-B抑制剂筛选了9个化合物的利尿活性,化合物4、10、17、18和20对UT-B均有一定的抑制活性,化合物18和化合物20存在明显的量效关系。化合物18的IC50为13.949μM,20的IC50为7.755μM。结论:本课题研究了南蛇藤中雷公藤红素的最佳提取工艺,对比了南蛇藤传统提取拌样柱层析与药材不经拌样柱层析的分离效果,得到了更高效的从南蛇藤中提取纯化雷公藤红素的工艺。研究了长管红山茶的化学成分,并做了简单利尿作用的研究,填补了长管红山茶相关领域的空白,为其更进一步的研究奠定基础。
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