淫羊藿素联合顺铂抗非小细胞肺癌作用机制研究

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背景:淫羊藿素(icaritin,ICT)作为一种中药成分,研究发现淫羊藿素对多种实体和非实体肿瘤具有一定抗肿瘤作用,同时也具有保护心血管系统、促进骨骼生长发育、提高免疫力。而在非小细胞肺癌化疗中,以铂类为基础的化疗,其毒副作用大,且存在部分患者对铂类化疗不敏感。目的:本研究通过从细胞水平,研究淫羊藿素是否能增强顺铂抗非小细胞肺癌抑制作用,并研究其可能的作用机制,同时研究淫羊藿素和顺铂对正常支气管上皮细胞的毒性作用。方法:用不同浓度的淫羊藿素、顺铂及淫羊藿素联合顺铂处理A549细胞不同时间后观察A549细胞形态学变化;MTT法测定不同浓度的淫羊藿素、顺铂及淫羊藿素联合顺铂处理A549细胞、支气管上皮细胞BEAS-2B细胞株不同时间后细胞增殖抑制影响,计算抑制率和IC50值;细胞克隆实验检测不同浓度的淫羊藿素、顺铂及淫羊藿素联合顺铂处理A549细胞处理A549细胞24h后对细胞克隆形成的影响;流式细胞仪检测不同浓度的淫羊藿素、顺铂及淫羊藿素联合顺铂处理A549细胞处理A549细胞24h后对细胞细胞周期及凋亡的影响;Western blotting实验检测不同浓度的淫羊藿素、顺铂及淫羊藿素联合顺铂处理A549细胞24h后对细胞中AKT、p-AKT、Bcl-2、Bim、Caspase-9蛋白质表达水平的影响。结果:(1)淫羊藿素、顺铂及淫羊藿素联合顺铂能使A549细胞的细胞形态发生明显改变,且随作用时间延长细胞形态变化更加明显;联合组的细胞形态变化得更加明显,。(2)淫羊藿素可抑制A549细胞增殖,其抑制作用呈时间-剂量依赖性。(3)顺铂可抑制A549细胞增殖,其抑制作用呈时间-剂量依赖性。(4)淫羊藿素联合顺铂对A549细胞增殖抑制作用明显高于单药组。各联合指数CI均小于0.9,淫羊藿素可协同增强顺铂抑制A549细胞增殖作用。(5)淫羊藿素组对BEAS-2B细胞的活性抑制较低,细胞毒性较少;顺铂组BEAS-2B细胞活性抑制相对较大,细胞毒性较大;淫羊藿素联合顺铂后并不会大幅度增加顺铂对BEAS-2B细胞的细胞毒性。(6)淫羊藿素、顺铂单药可抑制A549细胞克隆形成,联合组与单药组比较,联合组明显抑制A549细胞克隆形成。(7)淫羊藿素诱导A549细胞周期阻滞于G2/M;顺铂诱导A549细胞周期阻滞于G0/G1期和S期;淫羊藿素联合顺铂诱导A549细胞周期阻滞于S期。(8)淫羊藿素、顺铂及淫羊藿素联合顺铂可明显诱导A549细胞发生凋亡,且联合组与单药组比较,联合组凋亡率明显高于单药组。(9)Western blotting实验结果显示:联合组与单药组比较,联合组能够显著下调AKT、p-AKT的表达水平、抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平,并上调凋亡蛋白Bim, Caspase-9蛋白的表达水平。结论:淫羊藿素可通过细胞毒性作用、抑制非小细胞肺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,与顺铂联合后对非小细胞肺癌细胞增殖具有协同抑制作用,其作用机制可能与PI3K/AKT信号通路介导的细胞凋亡途径相关。淫羊藿素联合顺铂应用治疗非小细胞肺癌,并不会大幅度增加顺铂的支气管上皮细胞的细胞毒性,提示淫羊藿素联合顺铂治疗非小细胞肺癌具有一定可行性和临床应用价值。
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