用RNAi技术抑制肝癌细胞系SMMC-7721中DNMT3B对下游基因表达及细胞增殖的影响

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目的:通过检测DNMT3B (DNA methyltransferase 3B,DNMT3B)在不同肝癌细胞系中的表达水平和分析DNMT3B表达抑制所诱导的下游基因的表达及癌细胞增殖凋亡情况,探讨DNMT3B和肝癌发生的关系。方法:应用实时荧光定量RT-PCR (Real-Time Fluorescent Quantitative RT-PCR)方法分析正常肝细胞系、肝癌癌旁细胞系及7个肝癌癌细胞系中DNA甲基转移酶表达水平,同时分析肝癌细胞系SMMC-7721中DNMT3B表达抑制所诱导的发育和肿瘤发生相关的基因SNCG,PDCD4和MBD3的表达,并以MSP(Methylated Specific PCR,MSP)方法检测SNCG基因的启动子区甲基化状态。以流式细胞仪技术检测DNMT3B表达抑制对细胞增殖力及凋亡率的影响。结果:DNMT1,DNMT3A,DNMT3B在所检测的肝癌细胞系中均存在高表达的趋势,尤其DNMT3B在肝癌细胞系中的表达水平明显高于肝癌癌旁和正常肝细胞系,提示DNA甲基转移酶的高表达可能与肝癌发生有关。DNMT3B表达抑制诱导了与发育和肿瘤发生相关基因SNCG、MBD3、PDCD4的表达,对其中的SNCG基因的启动子区甲基化状态检测未发现明显的改变,表明DNMT3B表达抑制并未引起SMMC-7721细胞中SNCG基因的启动子区去甲基化,其高表达可能存在其他的机制。DNMT3B表达抑制,肿瘤细胞的增殖力明显受到抑制,G0-G1期延长,凋亡率增高。结论:DNMT3B在肝癌细胞中的高表达可能与肝癌的发生有关。DNMT3B表达抑制诱导了某些肿瘤相关基因的表达,这种诱导并不完全依赖于DNMT3B对CpG位点的甲基化作用。抑制DNMT3B表达可降低肝癌细胞系SMMC-7721的增殖能力。
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