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背景:目前旧药的新功能引起越来越多的关注,特别是用于癌症治疗方面,且治疗同时很少能缓解癌症疼痛。自噬是一种重要的生物降解过程,与癌症的发病机制密切相关。自噬介导有缺陷的细胞器、错误折叠或聚集的蛋白质和某些长寿命分子的再利用,以调节细胞稳态。自噬在癌症中发挥双重作用,既可以抑制细胞凋亡促进既定肿瘤的生长,又可以通过阻止受损蛋白质和细胞器的累积起到肿瘤抑制的作用。肿瘤所处的微环境营养匮乏。在营养匮乏压力下,细胞可通过细胞自噬获取能量,度过“难关”。因此,通过调节自噬,或许可以抑制癌症的发展和转移,杀死癌细胞,增强化疗药物的抗肿瘤作用。罗哌卡因是一种临床上常用的氨基酰胺类局部麻醉药,主要用于外科手术,分娩和术后镇痛。本课题的主要目的是为了探讨罗哌卡因是否可以参与癌症治疗新作用以及自噬在其中所扮演的角色。方法:将Hela细胞和B16细胞分为对照组(Control),饥饿组(Starvation,Starv),罗哌卡因组(Ropivacaine,Rop),氯喹组(Chloroquine,CQ),饥饿+罗哌卡因组(Starv+Rop),饥饿+氯喹组(Starv+CQ),罗哌卡因+氯喹组(Rop+CQ),分别处理0、4、12、24小时。随机将6-8周龄的雄性C57BL/6的荷瘤小鼠分为对照组(Control),热量限制组(caloric restriction,CR),罗哌卡因组(Rop)以及罗哌卡因+热量限制组(Rop+CR),处理一周,检测机械痛并取肿瘤组织。使用TUNEL染色、Hoechst 33342/PI双染和MTT检测细胞活力及细胞凋亡程度,使用免疫荧光标记LC3、LAMP1和网格蛋白评估噬体聚集水平、自噬溶酶体的形态和自噬性溶酶体再生(autophagic lysosome reformation,ALR),使用免疫印迹检测LC3-Ⅱ、p62和Cath D蛋白表达水平。结果:与对照组相比,罗哌卡因组与饥饿组处理24小时都会引起自噬体形成,自噬标志物LC3Ⅱ表达和LC3荧光点聚集增多;在饥饿组处理24小时的细胞中大多数自噬溶酶体会转变为新的溶酶体,而在罗哌卡因组或罗哌卡因+饥饿组处理的细胞中自噬溶酶体一直存在,LAMP1和LC3的重叠信号一直存在并且网格蛋白的荧光和LAMP1的荧光之间的共定位无明显变化;与对照组相比,罗哌卡因组或罗哌卡因+饥饿处理组破坏了自噬性降解,p62,LC3II水平显着增加而Cath D水平降低。在在体实验中,与对照组小鼠相比,罗哌卡因+CR组小鼠肿瘤体积明显减少,并且机械性刺激缩足阈值(paw withdrawal threshold,PWT)显着增加。结论:罗哌卡因破坏了ALR以及自噬性降解,这与在饥饿环境中杀死癌细胞有关。在动物模型中,罗哌卡因与CR联合处理能有效地抑制肿瘤生长。同时,在肿瘤生长的早期阶段,罗哌卡因给药可暂时缓解肿瘤引起的机械性疼痛;在晚期,罗哌卡因与CR联合处理持久地减少了机械疼痛。