背景:卵巢癌(ovarian cancer,OC)的发病率在女性生殖器恶性肿瘤中排名第三,其死亡率在女性生殖器恶性肿瘤中排名第一,严重威胁着女性的生命健康。尽管卵巢癌患者进行了广泛的肿瘤细胞减灭术以及基于顺铂(DDP)的术后化疗,其年生存率一直在20%-30%左右波动,10年生存率也仅为4%-20%。由于卵巢癌缺乏特异性的临床症状以及可靠的早期诊断方法,大多数卵巢癌患者开始治疗时已处于晚期阶段,难以达到满意的肿瘤细胞减灭目标,因此,术后化疗对延长患者的生存期尤为重要。卵巢癌患者接受基于顺铂的化疗时,约有15%-25%的患者存在原发性耐药,约80%的患者最终会发展为继发性顺铂耐药,因此,患者对顺铂的耐药性可直接影响卵巢癌患者的化疗疗效以及预后。目前,探索卵巢癌耐药机制,寻找新型耐药逆转剂已成为全球肿瘤学的研究热点。环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)可激活蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)和cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB),它们在基因调控、细胞迁移、细胞增殖、细胞凋亡和线粒体稳态等方面发挥着重要的作用,而磷酸二酯酶(cyclic nucleotide phosphodiesterase,PDEs)则负责将cAMP水解为相对应的无活性5’-磷酸。近年来,一些学者已经开始研究抑制PDE4的活性是否有抗肿瘤作用。我们之前的研究探索了PDE4抑制剂——罗氟司特在治疗卵巢癌方面的作用。给予罗氟司特后,卵巢癌细胞系OVCAR3和SKOV3的增殖受到抑制,细胞凋亡明显增加。罗氟司特通过激活OVCAR3和SKOV3细胞中cAMP/PKA/CREB途径,使线粒体铁蛋白(mitochondrial ferritin,FtMt)的表达水平上调,FtMt的过度表达可诱导细胞凋亡并抑制肿瘤发展。PKA抑制剂H89可抑制细胞内FtMt的表达,在其作用下,罗氟司特对卵巢癌细胞的作用被逆转,结果表明罗氟司特通过PKA/CREB途径抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡。此外,下调CREB也可逆转罗氟司特对卵巢癌细胞的作用,同时显著抑制FtMt的表达。这些发现表明罗氟司特通过cAMP/PKA/CREB信号通路上调FtMt的水平,同时抑制卵巢癌细胞增殖并促进细胞凋亡。DDP是卵巢癌联合化疗的基础药物,在卵巢癌的综合治疗中发挥着重要作用。然而,罗氟司特在卵巢癌DDP敏感性中的作用仍不清楚,该研究可能为卵巢癌顺铂耐药问题找到新的突破口。目的:我们以前的研究结果证明:罗氟司特通过cAMP/PKA/CREB信号通路上调FtMt蛋白在卵巢癌中的表达,从而抑制卵巢癌细胞的增殖和诱导细胞凋亡。在本课题中,我们旨在研究罗氟司特对卵巢癌顺铂敏感性的影响。内容及方法:选择OVCAR3和SKOV3两种卵巢癌细胞系,分为空白对照组、DDP处理组、DDP+罗氟司特处理组,以及用CREB shRNA(short hairpin RNA)转染细胞下调CREB后,分别进行细胞活力、增殖、凋亡等测试,同时检测cAMP、PKA、CREB、p-CREB和FtMt的表达水平,比较各组实验结果,从而证实罗氟司特对卵巢癌DDP敏感性的作用。1.罗氟司特对卵巢癌细胞DDP敏感性的影响;2.罗氟司特对卵巢癌细胞中cAMP/PKA/CREB-FtMt信号通路的影响;3.CREB shRNA是否可逆转罗氟司特对卵巢癌细胞DDP敏感性的作用。结果:1.罗氟司特显著增强DDP对卵巢癌细胞的杀伤作用;2.罗氟司特通过激活cAMP/PKA/CREB信号通路,增加卵巢癌细胞中下游FtMt的表达;3.CREB的下调逆转罗氟司特对卵巢癌细胞敏感性的增强作用。结论:罗氟司特通过激活cAMP/PKA/CREB途径上调下游FtMt的表达,从而增强卵巢癌细胞的顺铂敏感性。研究结果表明,PDE4抑制剂——罗氟司特可能具有作为抗肿瘤药物治疗的潜力,或可能有助于克服卵巢癌的临床耐药性。