研究背景：SLE (systemic lupus erythematosus,系统性红斑狼疮)是一种自身免疫性炎症性疾病,可累及肾、血管、皮肤、关节和脑等全身多个器官。在SLE进展过程中,对核酸及其相互作用蛋白的免疫耐受缺失导致自身抗体产生最终引起全身炎症和组织损伤。尽管在控制感染和肾衰的医疗进展提高了红斑狼疮患者的生存时间,但目前仍缺乏有效的治疗手段阻止SLE自身免疫炎症的发生。传统的免疫抑制剂缺乏靶向免疫抑制作用,疗效不能保证,且副作用较多限制其应用。一些生物制剂在类风湿性关节炎、银屑病包括关节病型银屑病等应用获得成功,但应用于SLE并没有获得肯定的疗效。因此发展新的治疗药物控制SLE自身炎症的发生有着重要的意义。A20又称为TNFAIP3 (tumor necrosis factor alpha induced protein 3,肿瘤坏死因子α诱导蛋白3),是肿瘤坏死因子α诱导的锌指蛋白。全基因组关联研究证实TNFAIP3 (A20)是SLE的易感基因,A20异常表达与SLE的发病有着密切关系。之前的研究发现TNF-α刺激后红斑狼疮患者单核细胞异常低水平表达的A20导致NF-κB持续活化的炎症反应。因此我们推测系统性红斑狼疮患者炎症活化阶段A20表达相对不足导致NF-κB持续活化引起全身炎症反应可能是SLE发病机制之一,而通过药物干预手段提高A20的表达水平就可能成为治疗红斑狼疮的新策略。瑞香素(Daphnetin)是瑞香科属植物的自然提取物属于香豆素类化合物,它能显著提高小鼠体内A20的表达,且对自身免疫性关节炎发挥抗炎治疗作用。目前以重组腺病毒为载体在动物体内过表达目的基因的研究方法已经被广泛应用于基础研究和基因治疗中。本研究利用瑞香素干预和重组腺病毒两种方法在系统性红斑狼疮小鼠模型中高表达A20蛋白,观察在系统性狼疮小鼠模型体内提高A20的表达是否能缓解SLE炎症反应以及深入探讨A20对SLE炎症的治疗机制,从而加深对SLE发病机理的认识,为SLE的治疗提供新的治疗策略。研究一瑞香素诱导A20高表达抑制NZB/W F1小鼠炎症反应目的：研究瑞香素诱导的高表达A20是否对NZB/W F1狼疮模型小鼠的炎症有潜在的治疗效应。方法：16-18周NZB/W F1和BABL/c随机分为三组：NZB/W F1小鼠未治疗组(SLE; n= 20)、NZB/W F1小鼠瑞香素治疗组(Daphnetin; n=20)、BABL/c阴性对照组(Sham;n=10)。利用试剂盒检测血尿素氮水平评估小鼠肾脏功能；酶联免疫吸附试验检测血清anti-nRNP IgG、anti-dsDNA IgG、TNF-α和IL-6；蛋白质印迹法检测外周血单核细胞pNFKB-p65和A20蛋白表达水平；曼-惠特尼u检验或单因素方差分析统计组间差异,结果表示为x±s。结果：瑞香素治疗后A20表达比未治疗组显著升高,SLE组小鼠A20表达比阴性对照组小鼠高；SLE模型小鼠血清TNF-α和IL-6比正常小鼠显著升高,瑞香素治疗后血清TNF-α和IL-6水平明显降低；SLE组小鼠血清anti-nRNP IgG和anti-dsDNA IgG高于阴性对照组小组,瑞香素治疗组小鼠血清anti-nRNP IgG和anti-dsDNA IgG低于SLE组小鼠；瑞香素治疗后小鼠尿素氮水平降低表明肾脏损伤减轻；SLE组pNFKB-p65蛋白表达比对照组提高,而瑞香素治疗后pNFKB-p65蛋白表达显著下降。结论：瑞香素诱导的高表达A20对NZB/W F1狼疮模型小鼠的炎症有治疗效果,高表达的A20使NF-KB活性下调可能其治疗机制。研究二腺病毒介导A20过表达缓解pristane诱导的狼疮肾炎目的：研究腺病毒介导的过表达A20是否对pristane诱导的狼疮模型小鼠肾炎症有治疗效应。方法：6-8周龄BALB/c雌性小鼠腹腔内注射0.5mL pristine或者PBS,注射PBS的小鼠则成为正常对照组,3个月后注射pristane的小鼠随机分为Ad-A20、Ad-control和pristane组并在腹腔内分别注射1.0×109pfu Ad-A20、Ad-control和PBS；利用ELISA试剂盒检测血清IL-1β、IL-6IgG、anti-nRNP、anti-dsDNA和尿白蛋白；肾脏石蜡切片进行H&E染色并在光镜下观察,以双盲的方式对每只小鼠8个视野肾小球和肾小管评分进行肾脏病理评估；肾脏冰冻切片进行IgG和C3免疫荧光染色并在荧光显微镜下进行观察,荧光强度利用Image J软件评估并评分；蛋白质印迹法检测A20、NLRP3、 ASC、p-IκB、IκB、F4/80、CCL2、Caspase-1p20、p-NF-κBp65和NF-κBp65蛋白表达水平；曼-惠特尼“检验或单因素方差分析统计组间差异,结果表示为x±s。结果：Pristane组和Ad-control组小鼠腹腔巨噬细胞A20蛋白较PBS组小鼠比较而言表达轻度上调,而Ad-A20治疗组小鼠腹腔巨噬细胞A20蛋白较其他三组比较而言显著上调；Pristane组和Ad-control组小鼠血清抗dsDNA和抗nRNP抗体水平显著高于PBS组小鼠,而Ad-A20治疗组小鼠血清抗dsDNA和抗nRNP抗体水平则较Ad-control组显著降低但仍高于PBS组小鼠；病理半定量分析表明Ad-A20组小鼠肾小球和肾小管活动度计分仅稍高于BPS组小鼠,而Ad-A20组小鼠肾小球和肾小管活动度计分显著低于Pristane组和Ad-control组小鼠。小鼠24小时尿液白蛋白检测表明Pristane组小鼠尿液白蛋白显著高于PBS组小鼠,而Ad-A20组小鼠尿液白蛋白低于Ad-control组小鼠；Pristane组和Ad-control组小鼠肾脏CCL2和F4/80表达水平显著高于PBS组小鼠,而Ad-A20治疗组小鼠CCL2和F4/80表达水平则较Ad-control组显著降低；Pristane组和Ad-control组小鼠β-IκB和p-NF-KBp65表达水平显著高于PBS组小鼠,而Ad-A20治疗组小鼠β-IκB和p-NF-KBp65表达水平则较Ad-control组显著降低；Pristane组和Ad-control组小鼠NLRP3、ASC和Caspase-1p20表达水平显著高于PBS组小鼠,而Ad-A20治疗组小鼠NLRP3、ASC和Caspase-1p20表达水平则较Ad-control组显著降低。结论：腺病毒介导的过表达A20缓解了pristane诱导的SLE模型小鼠炎症和肾脏损伤,其治疗机制可能与抑制巨噬细胞NLRP3炎性小体和NF-κB活性相关。由于能对NLRP3炎性小体和NF-κB活性进行双重抑制,过表达A20有望成为治疗SLE的新选择。