目的:近年来,胃癌在人类恶性肿瘤中排名第三,每年导致近800,000人死亡。探索敏感或有效的生物标志物对胃癌患者的早期诊断和治疗至关重要。据报道作为非编码蛋白的LncRNA在胃癌发病和发展中起着重要作用,本论文通过TCGA数据库筛选出在胃癌患者中异常高表达的LncRNA SHANK3,并通过DIANA tools找到与LncRNA SHANK3有结合位点的Hsa-miR-4530。据已有研究报道,Hsa-miR-4530在众多肿瘤中是低表达的,不仅与LncRNA SHANK3表达成负相关,且具有明显的抑癌作用。而其在胃癌中的表达水平和是否会调控胃癌发生和进展仍是未知的。运动神经元和胰腺同源盒（MNX1）是一种同源盒转录因子,最近研究表明MNX1在多种癌症发展发生中起着重要的作用,然而,到目前为止并未报道MNX1在胃癌中的表达情况。基于以上研究现状,本论文将深入研究LncRNA SHANK3/Hsa-miR-4530/MNX1信号轴对胃癌发生发展的调控机制,明确LncRNA SHANK3在胃癌中的表达和生物学功能,以及LncRNA SHANK3是否通过调控Hsa-miR-4530来靶向MNX1,从而影响肿瘤的增殖、迁移和侵袭等功能的变化,为未来胃癌的预防和治疗带来新的见解和依据。方法:用QPCR技术检测Hsa-miR-4530、LncRNA SHANK3、MNX1的RNA表达水平,通过Western Blot技术分析PCNA、SNAIL、MNX1的蛋白表达水平。用分子生物学方法包括PCR技术、定点突变和同源重组来构建实验相关各个基因的过表达或敲降质粒以及野生型和定点突变型的荧光素酶报告基因质粒。利用慢病毒包装技术结合药筛法构建LncRNA SHANK3基因稳定敲降的胃癌细胞系。通过荧光素酶报告基因方法确认Hsa-miR-4530和MNX1的3’UTR的结合以及Hsa-miR-4530和LncRNA SHANK3的3’UTR的结合。通过CCK-8细胞活力测定法、集落形成法和EDU细胞增殖测定法来分别验证LncRNA SHANK3、Hsa-miR-4530以及MNX1对胃癌细胞增殖能力的影响。通过划痕实验和Transwell实验法来分别验证敲降LncRNA SHANK3、过表达或敲降Hsa-miR-4530以及MNX1对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响。裸鼠成瘤实验分析在体内稳定敲降LncRNA SHANK3对肿瘤进展以及增殖相关蛋白Ki-67的影响。通过功能回复实验来验证LncRNA SHANK3/Hsa-miR-4530/MNX1三者之间的相关性。结果:集落形成实验和EDU细胞增殖测定的结果显示,LncRNA SHANK3的有效敲降抑制了胃癌细胞的活力和增殖能力。划痕实验结合Transwell小室法的结果表明,LncRNA SHANK3的有效敲降抑制了胃癌细胞的迁移和侵袭能力。裸鼠皮下成瘤实验发现LncRNA SHANK3的有效敲除抑制了胃癌在体内的生长。双荧光素酶报告基因实验显示LncRNA SHANK3与Hsa-miR-4530存在结合位点并相互作用。QPCR实验显示Hsa-miR-4530在胃癌中的表达与LncRNA SHANK3呈负相关性。CCK-8实验法与EDU细胞增殖实验显示,在胃癌细胞中过表达Hsa-miR-4530会抑制胃癌细胞的活力和增殖能力,而下调Hsa-miR-4530则会促进细胞的增殖能力。划痕实验和Transwell实验法的结果表明,上调Hsa-miR-4530会抑制细胞的迁移和侵袭能力,下调Hsa-miR-4530则呈现相反的趋势。此外,回复实验表明LncRNA SHANK3参与了Hsa-miR-4530对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的调控。双荧光素酶报告基因实验与Western blot实验显示Hsa-miR-4530会与MNX1的3’UTR结合并抑制MNX1的表达。集落形成实验和EDU细胞增殖测定,MNX1的有效上调可提高胃癌细胞的增殖能力,下调MNX1则出现相反的趋势。划痕实验结合Transwell实验法测定过表达MNX1会提升胃癌细胞的迁移和侵袭能力,MNX1的有效敲降则呈现相反的趋势。此外,回复实验表明LncRNA SHANK3参与了MNX1对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的调控。结论:LncRNA SHANK3在胃癌细胞中是高表达的,并且其高表达与不良预后有关。LncRNA SHANK3可能调控胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力从而影响胃癌发生进展。LncRNA SHANK3通过竞争性结合Hsa-miR-4530拮抗Hsa-miR-4530对MNX1表达的抑制,从而来调控胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭功能。这些发现从新颖的角度阐述了我们对胃癌发生机制的理解,并为抑制胃癌的进展提供了新的研究思路。