论文部分内容阅读
尿苷酸(UMP)作为猪乳中含量最丰富的单核苷酸,随着泌乳期的延长,其含量不断下降,即使在泌乳后期,其含量也是其它单核苷酸的数倍。因此,本试验拟探究UMP及其代谢物尿苷(UR)对超早期断奶仔猪的影响。本实验选择与配公猪一致、胎次相近、预产期相近、体型相近的长大二元杂产仔后的母猪若干头,随机选出平均体重相近12日龄断奶仔猪21头,随机分成3个处理组(对照组、UMP组、UR组),在基础日粮基础上,分别给对照组,UMP组和UR组的仔猪在每天上午八点灌服10mL生理盐水,0.476g/10mL以及0.348/10mL的UMP及UR盐溶液,每个处理7个重复,单栏饲养,实验期10天。试验期间,观察记录猪的采食、精神状况,有无腹泻及猪舍温度、湿度等。在试验结束时空腹12h后称重,采集血样后屠宰,采集十二指肠,空肠及回肠肠道组织福尔马林固定,用于肠道形态分析;采取十二指肠,空肠及回肠肠道黏膜分子样各一份,采用qRT-PCR检测肠道相关基因的上调与下调,探索嘧啶核苷酸代谢水平以及对肠道紧密连接蛋白的影响;采用TUNEL和体外实验验证UMP和UR对肠道上皮细胞的致凋亡作用。研究结果表明:(1)UMP/UR对断奶仔猪生长性能的影响与对照组相比,UMP和UR可显著增加仔猪的日增重(P<0.05),显著降低了仔猪的腹泻率(P<0.05)及腹泻指数(P<0.05);对照组,UMP组及UR组仔猪末重分别为3.64±0.21 kg,4.08±0.19 kg(P>0.05)及3.91±0.11 kg(P>0.05);日增重分别为34.67±11.16 g,73.80±11.67 g(P<0.05)及71.17±6.66 g(P<0.05)。(2)UMP/UR对断奶仔猪肠道形态的影响与对照组相比,UMP和UR可显著增加空肠肠道绒毛高度与隐窝深度(V/C)的比值,但对绒毛高度,隐窝深度无显著影响(P<0.05);UMP和UR对空肠及回肠这三项指标没有显著影响(P>0.05)。(3)UMP/UR对断奶仔猪肠道黏膜嘧啶核苷酸酶代谢的影响与对照组相比,UR显著增加十二指肠黏膜CMPK1,RRM2,UPTR,CTPS1以及CTPS2的表达(P<0.05),而UMP对嘧啶核苷酸代谢酶的变化无影响(P<0.05);UMP和UR均能降低空肠黏膜CAD和RRM2的表达(P<0.05),且UR能显著降低空肠黏膜CTPS1的表达(P<0.05);在回肠黏膜内,UMP及UR显著降低仔猪回肠黏膜CTPS1的表达(P<0.05)。(4)UMP/UR对断奶仔猪肠道黏膜紧密连接蛋白表达的影响与对照组相比,UR显著增加十二指肠黏膜Claudin-3,E-Cadherin的表达(P<0.05),而尿苷酸对十二指肠黏膜紧密连接蛋白的基因表达无影响(P>0.05);与对照组相比,尿苷与尿苷酸对十二指肠黏膜紧密连接蛋白ZO-1及Occludin无显著影响,但是,相比较于UMP组,UR显著增加了十二指肠肠道黏膜ZO-1及Occludin的表达(P<0.05)。然而,UMP和UR对空肠及回肠黏膜紧密连接蛋白基因表达无影响(P>0.05)。(5)UMP/UR对断奶仔猪肠道上皮细胞的凋亡作用TUNEL结果显示,与对照组相比,UR增加了十二指肠绒毛顶端细胞的阳性表达,凋亡增加;但是,UMP组影响较小;而且,UR,UMP对肠道上皮细胞的凋亡效应集中在十二指肠,对空肠及回肠影响较小;体外细胞流式结果显示,10mM UMP及50mM UR处理肠道上皮细胞6小时,能够显著增加肠道上皮细胞的凋亡(P<0.01)。综上,UMP和UR能够降低超早期断奶仔猪腹泻率及腹泻指数,维护仔猪肠道黏膜形态,增加仔猪十二指肠紧密连接蛋白基因的表达,增加自身在肠道的代谢过程;另外,结合生产数据及凋亡数据,我们得出,UMP和UR的致凋亡作用促进了肠上皮细胞的更新,这可能也是促进仔猪日增重显著增加,维持肠道形态,增加空肠V/C值的原因。