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黄瓜在我国蔬菜周年供应上占有重要地位,但易受多种病害的危害而使产量降低、品质下降。传统的育种方法周期长、效率低,用传统的育种方法很难得到具有抗性的优良品种。
本试验以黄瓜自交系01、02、03的子叶节为外植体,利用农杆菌介导法将商陆抗病毒蛋白基因(PAP)导入黄瓜,建立了高效稳定的植株再生体系和遗传转化体系。探讨了影响遗传转化频率的主要因素,获得了阳性转基因植株。主要结果如下:
1.丛生芽诱导最佳的外植体类型是子叶节。基因型对不定芽分化频率影响很显著。自交系02不定芽分化频率最高,为80.0%;自交系03居中,为58.3%;自交系01最低,为33.3%。最佳不定芽分化培养基是MS+BA1.0mg/L,分化频率达81.8%。AgNO<,3>对黄瓜不定芽的分化有显著的促进作用,以2.0mg/L时分化频率最高,达90.8%。不定芽在MS培养基上的生根率达到100%。
2.遗传转化最适宜的条件:外植体预培养1d,侵染20-25min,共培养2-3d,转接至抑菌筛选培养基MS+BA1.0mg/L+Kan70mg/L+Carb300mg/L上进行培养,获得的抗性芽经伸长、生根培养,炼苗移栽能正常生长。
3.对再生植株进行PCR检测,PCR阳性率为57.14%,转化率为3.96%。利用Southern杂交进一步检测,得到6株转基因植株。初步证明目的基因已经整合到黄瓜基因组中。人工接种病毒结果显示,与对照植株相比,两株转基因植株对CMV具有抗性。