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第一章不同浓度FFNT-5对肾成纤维细胞增殖的影响研究背景：肾间质纤维化是由各种原因引起的细胞外基质成分在肾间质内过度沉积,成纤维细胞是间质内主要肾脏固有细胞之一,是肾间质纤维化过程中最主要的细胞外基质分泌细胞,因此,能否阻止肾组织纤维化进程关键在于能否阻断肾成纤维细胞的过度增殖和分泌。肾间质纤维化的发生机制较为复杂、目前尚未完全阐明,可能与以下几个方面有关：间质成纤维细胞增殖、活化和表型转化；肾小管上皮细胞转分化为肌成纤维细胞；某些血管活性物质和细胞因子等对上述细胞生物学行为、细胞外基质产生及降解过程的影响；细胞外基质成分产生增多和(或)降解减少,最终导致肾间质细胞外基质积聚和纤维化。基于肾间质纤维化病理机制有多靶点与多环节的特点,研究和开发一种有效的抗纤维化药物已成为全球肾脏病领域的热点、难点之一。氟非尼酮(1-(3-氟苯基)-5-甲基-2-(1H)吡啶酮,fluorofenidone, AKF-PD)是由中南大学自主设计合成的一种新的吡啶酮类化合物,已获得国家发明专利,前期已在GLP实验室证明其毒性低,在细胞实验和动物实验中已证实具有广泛抗肾间质纤维化的作用；N-5是本研究组合成得到的一种新的小分子化合物,在前期抗肾纤维化药物筛选实验中我们初步发现FFNT-5可抑制肾成纤维细胞增长,因此我们在拟此基础上来观察不同浓度FFNT-5对肾成纤维细胞增殖的影响。目的：观察FFNT-5对肾成纤维细胞增殖的影响方法：采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度的FFNT-5对鼠肾成纤维细胞(BHK-21)增殖的影响。设立正常对照组、FFNT-5 (100μg/ml)组、FFNT-5 (200μg/ml)组、FFNT-5 (400μg/ml)组、AKF-PD (100μg/ml)组、AKF-PD (200μg/ml)组及AKF-PD (400μg/ml)组,分别于不同时间点(24、48、72小时)用酶标仪检测OD值并在倒置显微镜下观察细胞的形态及生长状况。结果：不同浓度FFNT-5作用于鼠肾成纤维细胞24h、48h、72h时均能明显抑制细胞增殖,并呈一定的浓度依赖性,各时间点观察细胞形态无明显变化。结论：FFNT-5可明显抑制鼠肾成纤维细胞的增殖。第二章不同剂量FFNT-5对UUO大鼠肾间质纤维化的治疗效果的观察研究背景：肾间质纤维化是各种慢性肾脏疾病发展至终末期肾衰竭的共同途径和主要病理基础；是在各种致病因子如损伤、炎症、药物、遗传因素等的作用下,间质细胞及细胞间质增多,尤其是基质蛋白合成增加、基质降解受抑制造成细胞外基质的大量堆积导致的肾小球硬化和小管间质的纤维化。积聚在肾间质的细胞外基质成分复杂,既包括正常肾间质已有的机制蛋白成分(Ⅰ、Ⅲ、纤连蛋白和腱蛋白等)的增多,还包括正常时仅存在于肾小管基膜的基质蛋白(Ⅳ型胶原和纤连蛋白等)的沉积。单侧输尿管梗阻(UUO)模型是目前研究肾间质纤维化经典的实验动物模型,通过结扎单侧输尿管引起肾脏引流系统的阻塞,导致急性肾脏功能的改变和慢性肾脏结构的损害,模拟临床上常见的输尿管梗阻导致的肾间质损伤,且有操作简单,易行,病变典型的特点。FFNT-5是本课题组合成得到的一种新的吡啶酮类化合物,前面的体外实验中已证实它能明显抑制肾成纤维细胞的增殖,并呈一定的浓度依赖性,对正常细胞无明显影响,前期完成了急性毒性试验研究,已在GLP实验室证明其毒性低。因此FFNT-5在体内能否影响肾组织中胶原的沉积达到抗肾纤维化的作用值得更进一步研究。目的观察不同剂量FFNT-5对肾间质纤维化的治疗效果.方法将25只SD雄性大鼠随机分为5组：假手术组、模型组、FFNT-5 62.5mg/kg组、FFNT-5 125mg/kg组及AKF-PD125mg/kg治疗组,每组各5只。除假手术组外,其他各组行单侧输尿管结扎术建立输尿管梗阻模型,假手术组只分离术侧输尿管,不予结扎及离断。UUO造模前1天起予以灌胃至术后13天,各治疗组药物均以0.5%CMCNa作为溶剂,FFNT-5 62.5mg/kg治疗组给与FFNT-5溶液62.5mg/kg/d灌胃、FFNT-5 125mg/kg治疗组给与FFNT-5溶液125mg/kg/d灌胃；AKF-PD治疗组给与AKF-PD溶液125mg/kg/d灌胃；模型组和假手术组每天给与等体积0.5%CMCNa灌胃。术后14天处死动物,取各组大鼠的术侧肾组织分别做HE和Masson染色,并用免疫组化方法检测肾脏Ⅰ、Ⅲ胶原表达水平。结果UUO术后14天,模型组大鼠肾间质损伤指数和肾间质纤维化程度较假手术组明显升高(P<0.0001)；除FFNT-5 62.5 mg/kg组外,余治疗组与模型组相比损伤指数及纤维化程度均显著下降(P<0.0001),但仍高于假手术组(P<0.05); FFNT-5 125mg/kg组疗效弱于AKF-PD125mg/kg组(P<0.05); FFNT-5 62.5 mg/kg至125mg/kg组随着剂量的增大,肾间质损伤指数及间质纤维化程度逐步减低,呈剂量依赖性；模型组梗阻侧肾组织Ⅰ、Ⅲ胶原表达显著上调；FFNT-5药物各治疗组与模型组相比Ⅰ、Ⅲ胶原表达不同程度下调。结论FFNT-5对UUO大鼠肾间质纤维化有治疗作用