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目的:应用放射性核素99mTc标记郑氏植物蛋白抗体片段(99mTcF(ab’)2),研究99mTc-F(ab’)2在荷瘤小鼠体内的生物学分布,并利用放射免疫显像原理进行荷瘤鼠显像,探讨郑氏植物蛋白抗体片段作为一种新型肿瘤阳性显像剂的可行性。
方法:1ZPPAb(郑氏植物蛋白抗体)片段F(ab,)2的制备:采用胃蛋白酶水解法。
2显像剂的标记方法及标记率测定:郑氏植物蛋白抗体片段F(ab,)2的标记采用预亚锡化法。对照组正常兔IgG的标记及处理方法同F(ab,)2。99mTc-F(ab’)2标记率测定在乙醇:水:氨=2:5:1-新华一号纸体系中各组分的Rf值为:99mTc-F(ab’)20.6-0.9,99mTc胶体0,99mTcO40.6-0.9;在生理盐水-新华一号纸体系中各组分的Rf值为:99mTc-F(ab,)20,99mTc胶体0,99mTcO41.0。
3荷H22肝癌小鼠体内分布试验:选取56只荷H22肝癌小鼠,随机分为四组,每组14只,实验组与对照组荷瘤鼠分别经尾静脉注射0.2ml(7.4MBq)的99mTc-F(ab’)2和99mTc标记的正常兔IgG(99mTc-IgG),改进的实验组与改进对照组荷瘤鼠分别在注射上述两种显像剂前30min注射人血清白蛋白。各组分别于注射显像剂后0.5h、1h、2h、3h、4h、5h、6h不同时相,处死动物,取血、心、肝、脾、肺、肾、胃、小肠、骨骼、肿瘤组织及对侧后肢肌肉作为对照,称重并测定放射性计数,计算各个脏器每克组织的放射性摄取比率(%ID/g值)及肿瘤与各组织器官的放射性计数比值(T/NT值)。
4荷H22肝癌小鼠显像试验:选取12只荷瘤小鼠随机分为4组,每组3只,分别为实验组、对照组、改进实验组及改进对照组。实验组与对照组分别经尾静脉注射0.2ml(7.4MBq)的99mTc-F(ab’)2和99mTc标记的正常兔IgG(99mTc-IgG),改进的实验组与改进对照组分别在注射上述两种显像前30min注射人血清白蛋白。各组分别于注射显像剂后0.5h、1h、2h、3h、4h、5h、6h不同时相进行显像,在采集的荷瘤鼠显像图像上利用感兴趣区(ROI)技术,以相同大小的感兴趣区域内计算肿瘤部位(T)和对侧肢体肌肉相应部位(NT)的放射性计数比值(T/NT值)。
结果:199mTc-F(ab’)2的标记率:99mTc-F(ab’)2的标记率约为82%。标记率=[(99mTc-F(ab’)2的放射性计数)/(99mTc-F(ab’)2的放射性计数+99mTc-胶体的放射性计数+游离99mTc的放射性计数)]×100%。
2荷H22肝癌小鼠体内分布试验结果:实验组荷瘤鼠中,肾脏的放射性摄取值最高,其次为肿瘤组织、肝及血液。肿瘤组织的%ID/g值于注入显像剂后6h达到最大值1.02%ID/g。肾脏于注入显像剂后3h达到最大值24.68%ID/g。胃肠道的放射性摄取值较低。改进实验组与实验组结果比较显示:改进实验组各个脏器的%ID/g值较实验组%ID/g值稍低。四组之间的同时相肿瘤组织的%ID/g值之间进行单因素方差分析和F检验,结果显示差异有统计学意义(P<0.01),采用q检验进行两两比较,结果显示实验组分别与对照组、改进实验组、改进对照组同时相肿瘤组织的%ID/g值之间比较差异有统计学意义(P<0.01)。
3荷H22肝癌小鼠显像结果:实验组与改进实验组荷瘤鼠在注入显像剂0.5h后肿瘤部位即可显影。实验组荷瘤鼠于注入2h肿瘤部位放射性核素浓聚最强(T/NT=7.14),随后肿瘤部位放射性核素浓聚减淡。对照组与改进对照组荷瘤鼠显像图上腹部及膀胱部位可见放射性核素浓聚影像,而左后肢肿瘤部位未见明显放射性核素浓聚影像。利用感兴趣区(ROI)技术,在荷瘤鼠显像图上计算肿瘤部位(T)和对侧肢体肌肉相应部位(NT)的放射性计数比值,实验组荷瘤鼠的T/NT值于注入显像剂后2h达到最大值7.14,至最后4h时其T/NT值有所下降。改进实验组荷瘤鼠的T/NT值较实验组荷瘤鼠的T/NT值低,于注入显像剂后3h达到最大值为5.24。
结论:本实验研究结果显示,肿瘤组织与99mTc-F(ab’)2存在特异性摄取显像,且在肿瘤组织中可以滞留一段时间。99mTc-F(ab’)2标记简单,使用方便,对显像仪器设备要求不高,有望成为一种潜在的新型肿瘤阳性显像剂。