蚯蚓组织提取物的抗菌、抗肿瘤及免疫增强活性研究

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蚯蚓又称地龙,广泛分布于我国各地。作为药用具有清热平肝、消炎止痛、活血化淤及主治高热狂燥等功效,可治疗20多种疾病,是我国宝贵的中药材之一。近年来人们对蚯蚓体内多种生物活性物质进行了研究,比如抗菌肽,但从抗菌、抗肿瘤和免疫增强活性三个方面同时进行研究还未见报道。目的:从蚯蚓中分离出具有生物活性的物质,然后对其进行抗菌、免疫增强和抗肿瘤实验,并研究其作用机理,为以后研究开发抗菌和抗肿瘤药物提供依据。方法:采用丙酮分步沉淀法制备蚯蚓组织提取物,对提取物进行SOS—PAGE凝胶电泳和Tricine—甘油SDS—PAGE凝胶电泳,以估计其分子量。然后采用平板打孔法对其进行抗菌试验。对抗菌活性强的粗提物采用微量平板法测定最小抑菌浓度(MIC)。选取抗菌活性强的粗提物进行葡聚糖G—15粗分离,收集分子量小的主要成分,即为粗分离蚯蚓组织提取物。对粗分离提取物进行高效液相色谱分析,判断其纯度。采用MTT法测定粗分离提取物对小鼠脾淋巴细胞的增殖作用和体外对S—180肉瘤细胞的抑制作用。建立小鼠S—180肿瘤模型,按给药剂量不同分组。将昆明种小鼠60只,随机分为六组,每组10只:(1)未接种肿瘤组,动物不接种肿瘤,以生理盐水灌胃,0.2 mL/只/天;(2)S—180肿瘤模型组,接种肿瘤,以生理盐水灌胃,0.2 mL/只/天:(3)粗分离提取物Ⅰ组,接种肿瘤,以100 mg/kg的粗分离提取物灌胃,0.2 mL/只/天;(4)粗分离提取物Ⅱ组,接种肿瘤,以300 mg/kg的粗分离提取物灌胃,0.2 mL/只/天;(5)粗分离提取物Ⅲ组,接种肿瘤,以500 mg/kg的粗分离提取物灌胃,0.2 ml/只/天;(6)S—180阳性对照组,接种肿瘤,每只以复方环磷酰胺20 mg/kg/d灌胃给药。研究粗分离提取物体内抗肿瘤的机理及其对吞噬细胞吞噬能力的影响,测定小鼠抑瘤率、胸腺指数、脾指数,并与抗癌药环磷酰胺相比较。结果:从蚯蚓中分离得到三种蚯蚓组织提取物,其中9倍丙酮蚯蚓组织提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和变形杆菌的抑菌活性最强,抑菌圈直径分别为1.7 cm、1.3 cm和1.5 cm,对大肠杆菌的MIC为:25 mg/mL,对金黄葡萄球菌和变形杆菌的MIC均为50 mg/mL。对9倍丙酮蚯蚓组织提取物粗分离得到的粗分离提取物分子量较小,分子量范围为3313Da—7823Da。粗分离提取物对小鼠脾淋巴细胞有较强的增殖作用,对S—180肉瘤细胞体内体外均有抑制作用,能提高荷S—180肉瘤小鼠胸腺指数和脾指数,提高小鼠吞噬细胞吞噬能力,对小鼠免疫能力有显著的提高。
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