目的:近年来,2型糖尿病的发病率日益增加,而影响病人预后的主要因素在于其慢性并发症出现的早晚及其严重程度,糖尿病并发症的出现与全身大血管及微血管的功能异常密切相关。随着对糖尿病发病机制研究的深入,内皮细胞受损在血管并发症发病过程中所起的作用越来越受到重视。假性血友病因子(vWF)升高被认为是血管内皮细胞损伤的标志之一。vWF是一种主要由内皮细胞、巨核细胞合成和分泌的糖蛋白,一方面,vWF作为凝血Ⅷ因子的载体,延长了Ⅷ因子的半衰期,有助于保持Ⅷ因子的活性,有助于内源途径生成凝血酶而加强凝血,另一方面vWF作为血小板与损伤内皮细胞黏附的“桥梁”,参与血小板黏附并进一步聚集于受损的内皮细胞,启动血栓形成的第一步。本研究的目的是通过建立2型糖尿病大鼠模型,检测其成模后0、4、8、12、16周的vWF浓度,以了解糖尿病大鼠随病程进展vWF的变化趋势,并进一步探讨糖尿病大鼠vWF浓度变化与血小板活化及血栓形成之间的关系,为临床预防及早期发现糖尿病患者血栓性并发症提供客观依据。方法:健康7周龄清洁级近交系Wistar大鼠120只(河北医科大学试验动物中心提供),体重180-220g,雌雄各半,随机分为两组:正常组( control group ,CON)50只,雌雄各半,作为对照;实验组(trial group ,TRI)70只,雌雄各半。正常组动物喂养普通饲料:蛋白质占23%,碳水化合物占50%,脂肪占5%;实验组动物喂养高脂饲料:在10000g普通饲料中加入150g食盐、50g白糖、2000g猪油、400g麻油、2000g花生、900g鸡蛋,其碳水化合物48%,脂肪22%,蛋白质20%。2月后实验组大鼠腹腔注射30mg/kg链脲佐菌素(STZ)(以PH4.4的0.1mol/L柠檬酸钠缓冲液配制成1%浓度),正常组大鼠腹腔注射同等量的柠檬酸钠缓冲液。一周后给所有动物做口服葡萄糖耐量试验(大鼠禁食12h后尾静脉取血测空腹血糖,然后按2g/kg体重灌胃50%葡萄糖溶液, 2h后尾静脉取血测2h血糖),空腹血糖≥7.0mmol/l,糖负荷后2小时血糖≥11.1mmol/l者为造模成功。从造模成功者中选取血糖较高的大鼠50只(雌雄各半)纳入正式试验,作为糖尿病组(diabetes group, DIA)。采用随机数字表随机将正常组和糖尿病组各分为0周、4周、8周、12周、16周5组,每组10只,雌雄各半,分别于以上时段空腹取血测定观测值。正常组一直喂普通饲料,糖尿病组继续喂高脂饲料,以防血糖回落,每2周测体重和空腹血糖(均为禁食10-12小时,尾静脉取血),空腹血糖<7.0mmol/l为剔除条件。于试验第0、4、8、12、16周末,大鼠禁食10-12小时后,10%水合氯醛腹腔注射麻醉,下腔静脉取血5-10ml注入EDTA抗凝试管内,3000转/分离心10分钟,取上清液,-80℃冰箱保存。待标本收集齐全后同批测定vWF浓度(ELASA法)。另同时取大鼠尿液约1ml及尾静脉血10μl,使用DCA2000+测定尿微量白蛋白及HbA1c。所用数据输入SAS统计软件包进行统计,计量资料用均数±标准差表示,两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析和Q检验,两者之间相关性关系采用直线相关分析。P<0.05为统计学有显著性差异。结果:1成模前正常组大鼠随年龄增长,体重稳定增加,血糖值均在正常范围;试验组大鼠体重增长较正常组快,但血糖值亦在正常范围。2正常组大鼠随年龄增长,体重增加,血糖值稳定,均在正常范围,各时间段之间无明显差别。糖尿病组大鼠随着病情的进展血糖值处于较高水平,无明显增高或降低,各时间段之间无明显差别(P>0.05);糖尿病组大鼠成模后体重增加,与正常组同时段比无明显差异。(附图1、附图2)3正常组大鼠各时间段vWF浓度无明显变化;糖尿病组大鼠在成模0周时vWF水平已有升高趋势,但无统计学差异,由4周开始vWF水平相对于对照组明显升高(P<0.05),各时间段相比随病程延长浓度逐渐增高,8周开始较前一时间段差异有统计学意义。(附图3、附表4)4糖尿病组大鼠HbA1c与vWF浓度呈正相关(r=0.712)(p<0.01)(附图4);vWF浓度与尿微量白蛋白浓度成正相关(r=0.896)(p<0.01)。(附图5)结论:1、2型糖尿病大鼠vWF的浓度随着病程的进展逐渐增加。2、vWF浓度的增加与HbA1c的增高呈正相关,与尿微量白蛋白的增加亦呈正相关。3、在早期对糖尿病病人进行vWF的监测,为临床预防及早期发现糖尿病患者血栓性并发症提供客观依据。