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精液保存技术的发展为人工授精技术在家畜生产中的成功应用提供了技术支撑,其中冷冻保存作为家畜品种改良的重要技术手段,能够提高优良种公畜的利用率。但是,由于在冷冻过程中精子受到冷休克引起的物理、化学和氧化损伤,导致冷冻-解冻后精子活力降低,影响其受精能力。目前的研究表明,造成精子冷冻-解冻后质量下降的主要原因是活性氧(ROS)过量累积诱导的氧化应激。在体外保存过程中,猪精子质膜中的多不饱和脂肪酸极易受到氧化损伤,导致细胞膜和DNA完整性受损,诱导精子发生凋亡。目前防止精子冷冻保存过程中ROS过量产生的措施之一就是在稀释液中添加外源抗氧化剂提升精子的抗氧化能力。表儿茶素作为一种天然抗氧化剂,具有多羟基结构,能够结合自由基起到抗氧化作用。虽然目前关于抗氧化剂具有冷冻保护效果的报道越来越多,但尚缺乏表儿茶素在猪精液冷冻保存中的基础应用研究。因此,本试验在猪精液冷冻稀释液中添加不同浓度表儿茶素,通过检测冷冻-解冻后猪精子活力、运动性能、抗氧化性能以及细胞凋亡等指标,评估表儿茶素的冷冻保护效果,确定表儿茶素在猪精液冷冻稀释液中的最适添加浓度。本研究获得的主要结果如下:1.在冷冻稀释液中添加表儿茶素能够有效提高冷冻-解冻后猪精子活力、运动性能、质膜和顶体完整率。与其他处理组相比,稀释液中添加75μmol/L的表儿茶素保存效果最好,显著提高了冷冻-解冻后精子活力(48.17%±0.67%)、曲线速度(37.71±1.04μm/s)、鞭打频率(3.55±0.12 Hz)、质膜完整率(49.70%±1.78%)和顶体完整率(50.45%±1.56%)(P<0.05);而表儿茶素浓度为200μmol/L时,各项质量指标与对照组差异不显著(P>0.05);除此之外,25μmol/L与50μmol/L表儿茶素组之间精子各项质量指标差异均不显著(P>0.05)。说明稀释液中添加75μmol/L表儿茶素可以有效提高冷冻-解冻后猪精子质量,对猪精子具有冷冻保护作用。2.在冷冻稀释液中添加表儿茶素能够有效提高冷冻-解冻后猪精子总抗氧化水平,其中当表儿茶素的浓度为75μmol/L时,精子的T-AOC为0.40μmol/m L,SOD、CAT和GPx活性分别为4.48 U/m L、25.67 U/m L和19.93μg/m L;同时降低了ROS水平(28.2%)和MDA含量(1.72 nmol/m L),且显著低于对照组(P<0.05);而表儿茶素浓度为200μmol/L时,精子各项指标与对照组相比差异不显著(P>0.05)。因此,在冷冻稀释液中添加75μmol/L的表儿茶素能够增强冷冻保存猪精子抵抗氧化损伤的能力。3.在冷冻稀释液中添加表儿茶素可以降低冷冻-解冻后猪精子凋亡水平,提高线粒体活性和ATP含量。与其他处理组相比,75μmol/L表儿茶素组精子凋亡水平显著降低(P<0.05),达到19.4%;线粒体膜电位和ATP含量显著提高(P<0.05),分别达到18.94%和16.79μmol/L;而表儿茶素浓度为25μmol/L、50μmol/L和200μmol/L各组精子各项指标与对照组无显著差异(P>0.05)。与对照组相比,在稀释液中添加75μmol/L表儿茶素显著提高了精子线粒体Cyt C和BCL-2的相对表达量(P<0.05),其中表儿茶素组线粒体Cyt C表达量与鲜精相比差异不显著(P>0.05),而BCL-2的表达量显著低于鲜精(P<0.05);与对照组相比,在稀释液中添加75μmol/L表儿茶素能够显著降低精子胞质Cyt C、Caspase-9和Caspase-3的相对表达量(P<0.05),其中Caspase-3的表达水平与鲜精相比差异不显著(P>0.05);虽然75μmol/L表儿茶素组精子BAX蛋白的表达水平低于对照组,但二者差异不显著(P>0.05)。本研究结果说明表儿茶素可以抑制线粒体Cyt C和Caspase途径调控的精子凋亡,从而有效提高猪精液冷冻保存效果。综上所述,本试验研究发现在猪精液冷冻稀释液中添加75μmol/L的表儿茶素能够明显改善冷冻-解冻后猪精子质量,降低ROS诱导的氧化损伤,有效抑制精子凋亡的发生,从而提高猪精液冷冻保存效果,为表儿茶素在猪精液冷冻保存中的应用提供理论依据。