蛋白质与核酸和小分子的相互作用的共振瑞利散射光谱及其分析应用

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近年来,蛋白质与核酸之间的反应由于其重要的生理学意义而受到广泛的关注,多种分析方法都应用于这两种生物大分子之间的反应及其识别机理的研究。但分子光谱法在该领域中的应用则较少。共振Rayleigh散射(Resonance Rayleigh Scattering,RRS)技术作为新兴的、简便的、高灵敏的分析技术受到人们的广泛关注,同时由于其对大分子非键作用,如缔合、聚集、偶极—偶极作用等非常敏锐,这使其具有生物大分子的间的反应机理研究和测定、表征及反应历程的研究极为有利。因此,我们以RRS法和吸收光谱法研究了蛋白质和核酸之间的相互作用、光谱特征、反应机理,本文还研究了用鞣酸测定蛋白质和某些金属螯合物测定核酸的新RRS法。 1 蛋白质与DNA相互作用的吸收光谱研究 本文尝试用紫外吸收光谱法研究蛋白质与核酸的相互作用,并将其应其用于反应机理的探讨。结果表明,蛋白质-核酸间的反应可引起紫外吸收光谱的变化。通过对其变化的研究,可以提供关于核酸-蛋白质相互作用的一些新的信息,基于此反应还可发展出紫外分光光度法测定核酸、蛋白质的新方法。当用胰蛋白酶测定DNA时,对于不同DNA的检出限在191.4ng至276.4ng之间,而对RNA灵敏度较低。当用hsDNA测定蛋白质时,对不同的蛋白质的摩尔吸光系数在2.9×105-9.92×106mol-1·cm-1之间,其相应检测限分别是27.4μg·mL-1(HSA),2.0μg·mL-1(Papain),4.1μg·mL-1(Pepsin),2.0μg·mL-1(BSA)和28μg·mL-1(Trypsin)。 2 胰蛋白酶与DNA相互作用的吸收光谱研究 本文研究了胰蛋白酶-DNA体系。文中研究了反应体系的RRS光谱特征、适宜的反应条件、反应的结合比,并推测了两者的结合方式。基于此反应还可将其用于核酸和蛋白质的相互测定。
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