紫丁香叶提取物HPLC指纹图谱的建立及原儿茶酸含量测定

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紫丁香叶属于木犀科丁香属植物,为紫丁香Syringa oblata Lind1、洋丁香Syringa vulgarisL或朝鲜丁香Syringa diatata Nakai的干燥叶,具有广谱抗菌和抗病毒的作用,通过其植物资源、化学成分、药理作用和临床应用等方面的研究报告,证明紫丁香叶是一味极具开发满力的中药。中药含有的活性成分是中药药效的物质基础,任何一种活性成分均不能体现出中医临床用药的整体疗效。中药指纹图谱是一种多指标的质量控制模式,不仅全而的反映中药所含化学成分的种类和数量,而且有效地体现中药成分的整体性和综合作用,从而更好地评价中药及其制剂的质量。紫丁香叶有效成分的含量和种类具有一定差异是由于其药材受到生长环境、采收季节、产地等因素影响,因此如果只分析某种单一成分作为指标是不能有效地控制质量和确保生物等效性。本实验以紫丁香叶作为研究对象,以C18柱为固相萃取柱对紫丁香叶进行前处理,建立了HPLC-二极管阵列检测器(DAD)检测原儿茶酸的方法,对紫丁香叶中的有效物质作了分析研究,保证实验方法的可行性、准确性和精密度,具体实验结果如下:通过对固相萃取柱的选择,比较C18和HLB柱的吸附回收率,HLB回收90.48%,C18回收88.79%,并综合比较,确定了使用HLB柱作为固相萃取柱。对比不同洗脱溶剂甲醇、丙酮、乙酸乙酯洗脱目标样品的回收率,确定使用色谱纯甲醇为洗脱溶剂。建立淋洗曲线,确定目标物质的洗脱体积为5mL,优化了样品净化过程,筛选出一种理想的前处理方法。实验结果表明,该方法具有提取速度快、净化效果好、便于操作、分析时问短、检测数量多、准确度高等优点。以HPLC反相色谱技术为主要分析手段,比较XDB-C18, ASB-C18, ODS-C18三个色谱柱的柱效,流动相选择,酸度考察,对紫丁香叶提取物中的原儿茶酸检测技术进行研究开发,确定使用ODS-C18(250*4.6mm,5μm)柱,二极管阵列检测器,流动相为甲醇-20mmol/L磷酸二氢钾(20:80,v:v),酸度为pH=2,检测波长260nm,进样量20μL,流速1.0mL/min,柱温30℃,建立紫丁香叶提取物SPE-HPLC指纹图谱,经过考察紫丁香叶提取物精密度、重复性、稳定性试验等内容,RSD均小于3%。说明本方法精密度、稳定性、重复性良好。确定了原儿茶酸为稳定性较好的特征峰,采用国家药典委员会发行的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A)”进行评价,结果10批成品的相似度在0.9以上,符合规定。并借助SPSS20.0软件对量化的指纹特征(色谱峰峰面积)进行了聚类分析及主成分分析,结果证明二种分析方法具有很好的一致性,可有效地对紫丁香叶提取物指纹图谱进行评价。从线性关系、精密度、准确性、及加标回收率等方面对所建立的HPLC分析方法进行评价,其中标准曲线y=75.757x-9.3676,R2=0.9997,原儿茶酸在2.58~83.32μg/mL线性关系良好,精密度的RSD小于1%,表明仪器精密度良好。各成分的平均回收率96.79%,表明准确性良好。实验表明显示该方法操作简单,稳定性、重现性好。对采自齐齐哈尔、大庆、北京、淄博、潍坊、长春、沈阳、虎林、鸡西、哈尔滨10个不同地区的供试样品研究,测定出含量在29.67~78.87μg/g,其中哈尔滨和鸡西样品含量较其他省份样品高。
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