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肺癌是严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率均呈上升趋势，上升幅度在我国居于各肿瘤之首。它的发生是多基因、多阶段、多因素的过程，同时也是细胞凋亡失调、细胞增殖失控的结果。有多种基因参与了肺癌的发生过程，它们相互调节、相互作用，以网络化的形式调控着肺癌的发生。 NF-кB(Nuclear thanscription factor-кB)是一种关键性的核转录因子，广泛存在于真核生物的胞质里，是一个由复杂的多肽亚单位组成的蛋白质家族，已确定的成员有五个，即RelA(P65)、RelB、C—Rel、NF-кB1(P50／P105)、NF-кB2(P52／P100)。NF-кB可以通过抑制细胞凋亡、促进细胞增殖和直接调控癌基因表达等方式参与肿瘤的发生，还与肿瘤的化疗敏感性等有密切关系。NF-кBP65是NF-кB家族的重要成员之一。研究发现NF-кBP65在大肠癌、肝癌、骨肉瘤、胰腺癌等多种肿瘤中表达增高，而它在肺癌中的作用及表达情况如何，尚未见到报道。 HSP70(Heat shock protein70)是人类发生应激反应时生成的主要的热休克蛋白，其基因表达的调节主要发生在转录水平。近年来研究发现，HSP70参与了细胞凋亡和肿瘤的发生过程，还可结合肿瘤细胞表面的抗原多肽，参与肿瘤的免疫。已发现HSP70在胰腺癌、喉癌、胃癌等肿瘤组织中有高表达。 目前许多研究表明在应激、缺血再灌注损伤和炎症等的发生过程中NF-кBP65和HSP70之间有相互调控的关系。但是，在肺癌发生过程中二者之间有无调控关系以及二者的作用如何，尚未见到报道。本研究采用Western blot方法对肺癌组织和配对的正常组织中的NF一沼P65和HSP70蛋白的表达情况进行了研究，并对二者在肺癌不同病理分型和临床分期的表达情况以及二者之间的关系作了初步的分析。方法:1.标本收集:本研究共收集肺癌组织(C组)和配对的正常组织(N组)各43例。其中有鳞癌18例，腺癌16例，腺鳞癌5例，大细胞肺癌1例，小细胞肺癌3例。收集的新鲜标本立即放入液氮中，后转入一80℃冰箱保存。2.标本组织蛋白的提取:快速剪取适量标本，O℃PBS充分洗涤，在冰预冷的悬浮缓冲液中匀浆后尽快加入等体积的ZxSDS凝胶加样缓冲液，然后将样品置于沸水浴中加热10min，超声断裂DNA，在室温下10，000印m将样品离心10min，上清液转移于另一Eppendorf管中，弃去沉淀物。所得上清液即为蛋白质提取物，一20℃保存。用紫外可见分光光度仪检测上清液中蛋白质提取物的OD值，计算使用城stem hiot免疫印迹法检测靶蛋白所需要的样品量。3.SDS一PAGE分离蛋白:应用12%的十二烷基磺酸钠一聚丙烯酞胺凝胶电泳 (SDS一PAGE)将组织蛋白进行分离。4.Wcstem blot:将凝胶上的蛋白转移到硝酸纤维素膜上，转移上蛋白的硝酸纤维素膜经封闭液封闭后，分别与一抗、二抗杂交，最后用3，3’一二氨基联苯胺(DAB)进行显色。5.照相:应用Bio Imaging System照相，并用Gene Tools软件分析各蛋白条带，将结果转换成数值资料，保存。6.统计学处理:所获资料采用统计分析系统SPSS10.0软件处理。结果:1.肺癌组织中NF一出P65蛋白表达结果:C一N配对中有74.4%(32/43)的癌组织NF一沼P65蛋白表达增高。NF一出P65在癌组织与正常组织的表达差异有统计学意义(尸<0 .05)。NF一KBP65在鳞癌组的表达增高率是72.2%(13/18)，腺癌组的增高率是62.5%(10/16)，5例鳞腺癌全部为表达增高，3例小细胞肺癌中有两例增高，1例大细胞肺癌表达增高。五种病理分型之间的表达差异无统计学意义(P>0.05)。NF一KBP65在肺癌I、11、111临床分期中的表达增高率分别是73.7%郑州人学2003年硕}论文肺癌组织NF一K BP65和HSP7O的表达及共关系的研究 (14/19)、75.0%(6/8)和83.3%(5/6)，三者之间差异无统计学意义(P>0.05)。2.肺癌组织中HSP70蛋白表达结果:C一N配对中有69.8%(30/43)的癌组织HSP70蛋白表达增高。HSP7O蛋白在癌组织与正常组织中的表达差异有统计学意义 (尸<0.05)。肺鳞癌组的HSP70表达增高率是83.3%(15八8)，肺腺癌组的表达增高率是62.5%(10/l6)，在5例鳞腺癌中有3例表达增高，3例小细胞肺癌中有1例增高，1例大细胞肺癌表达增高。五种病理分型的表达差异无统计学意义 (P>0.05)。肺癌I、11、1111临床分期中HSP70蛋白的表达增高率分别是68.4% (13/19)、62.5%(5/8)、83.3%(5/6)，三者之间差异无统计学意义(P>O.05)。3.肺癌组织NF一沼P65蛋白与HSP70蛋白表达异常率的比较:NF一出P65表达增高的患者中71.9%(23/32)的有 HSP70表达增高，NF一沼P65表达没有增高的患者中63.6%(7/11)的有HSP70表达增高。二者差异无统计学意义(P>0.05)。4.肺癌和正常组织中NF一虑P65蛋白与HSP70蛋白表达的相关性分析:对肺癌组和正常组中NF一沼P65与HSP70的表达量进行相关性分析，未发现两者之间存在直线相关关系(P>0.05)。结论:1.在肺癌组织中检测到了NF一出P65蛋白的高表达，其表达增高率是74.4%，与配对正常组织的差异有统计学意义。2.肺癌组织中HSP70蛋白表达增高，表达增高率为69.8%，与配对的正常组织差异有统计学意义。3.N