【摘 要】
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金银花是人们日常生活中比较受欢迎的食材,但酶促褐变会对其口感、风味、颜色有严重的影响。本文对引发金银花褐变的几种酶类以及其作用机理做了简单的介绍;金银花作为一种重
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金银花是人们日常生活中比较受欢迎的食材,但酶促褐变会对其口感、风味、颜色有严重的影响。本文对引发金银花褐变的几种酶类以及其作用机理做了简单的介绍;金银花作为一种重要的药食同源植物,其药用价值和商业价值巨大。选择金银花为研究对象,对其中多酚氧化酶的提取和纯化做了研究。主要研究内容和结论如下:参与金银花酶促褐变的酶类有:多酚氧化酶(PPO),主要参与金银花酶促褐变的酶类,通过催化果蔬中酚类物质氧化,导致褐变;过氧化物酶(POD),结合态的POD有减缓金银花褐变的作用,游离态的POD加速其褐变;苯丙氨酸解氨酶(PAL)促进酚类物质的合成,导致金银花褐变;过氧化氢酶(CAT)能够降低酚类物质的氧化速度,一定程度上减缓金银花褐变。匀浆法和丙酮粉法提取金银花中多酚氧化酶的对比研究发现,匀浆法提取酶量较大,活性较高,但纯度低,提取效果不理想。丙酮粉法虽然对酶量损失较大,整体活性也不高,但纯度尚可,且丙酮粉便于保存,进一步纯化后能够达到较高纯度。利用丙酮粉法提取金银花中多酚氧化酶,确定了最佳提取工艺为pH 7.5,料液比1:120、静置时间为14.5 min,得到平均比活力为131.732 U/mg。初步研究了金银花多酚氧化酶的纯化工艺,30%饱和度硫酸铵溶液下除去杂蛋白,在饱和度为80%的硫酸铵溶液下将目的蛋白初步分离。选用平衡时间短、洗脱效果好的DEAE-52纤维素作为离子交换剂,选择3.5*70cm的离子交换柱,在20mL/h的洗脱速度下纯化多酚氧化酶粗酶液。目的蛋白经电泳检测,只有一条谱带,达到电泳纯,其相对分子质量为43000D。
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