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目的:
观察发生压力负荷过重所致心衰时大鼠心脏交感神经密度变化与去甲肾上腺素转运蛋白(norepinephrinetransporter,NET)表达间的关系。
方法:
将20只雄性Wistar大鼠随机分为四组:即心衰1月组(n=5)、心衰2月组(n=5)、正常对照组(n=5)和心肌细胞培养取材组(n=5),对心衰1月组及心衰2月组大鼠采用腹主动脉缩窄术建立大鼠心脏压力超负荷心衰模型。(1)有创血流动力学检测:分别在手术1月后(对心衰1月组大鼠检测)、2月后(对心衰2月组及正常对照组检测)通过左心室导管测定血流动力学指标:平均动脉压(MBP)、左心室收缩压(LNSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左心室内压上升及下降最大速率(±dp/dtmax),计算左、右心室重量指数(LVMI、RVMI),观察心脏结构变化。(2)SPG荧光染色法(sucrose-potassium phosphate-glyoxylic acidmethod):取左心室(心衰1、2月及正常对照组)肌肉制作组织冰冻切片,用SPG荧光染色法观察心肌组织内交感神经密度变化,在荧光显微镜镜下观察显色结果(以380~420 nm高压汞灯为光源激发)并摄片。利用软件image pro plus6.0计数样本组织中交感神经的平均光密度(mean density)值。(3)心肌细胞培养:取心肌细胞培养组大鼠的心脏进行细胞分离,对大鼠的心肌细胞进行培养,然后对培养好的的心肌细胞进行爬片处理(爬好片的心肌细胞用于免疫组化双重染色)。(4)NET及TH免疫组织化学双重染色:取左心室(心衰1、2月及正常对照组)肌肉制作组织冰冻切片,将切片与爬好培养心肌细胞的玻片一起进行NET及TH免疫组织化学双重染色,观察左心室心肌组织中NET及酪氨酸羟化酶(tyrosine hvdroxvlase,TH)的变化,在显微镜镜下观查显色结果并摄片。利用软件image pro plus6.0计数样本组织中交感神经的平均光密度(mean density)值。
结果:
(1)心脏重量及血流动力学测量结果:心衰1月组LNMI、RVMI、MBP、LNSP、LVEDP、±dp/dtmax值均较正常对照组升高(p<0.05);心衰2月组LNMI、RVMI、MBP、LNSP、LVEDP、±dp/dtmax值均较正常对照组升高(p<0.05);心衰2月组MBP、LNSP、LVEDP、±dp/dtmax值均较心衰1月组降低(p<0.05),LVMI、RVMI升高(p<0.05)。
(2)心肌交感神经SPG荧光染色计数结果:心衰1、2月组及正常对照组染色计数值无明显变化(p>0.05)。
(3)NET及TH免疫组织化学双重染色计数结果:TH染色,心衰1、2月组及正常对照组染色计数值对比无明显变化(p>0.05)。NET染色,心衰1月组染色计数值较正常对照组降低(p<0.05);心衰2月组染色计数值较正常对照组降低(p<0.05);心衰2月组染色计数值较心衰1月组降低(p<0.05);培养心肌细胞对照组染色未见阳性结果。
结论:
长期压力超负荷心衰大鼠心脏交感神经密度较正常大鼠无明显变化,而NET表达水平降低,提示NET表达下降可能并非由于交感神经数量减少所致,而是由于其他的一些因素而导致,如内化、NET转录后异常、氧化负荷增加、细胞因子对心脏交感神经的损伤等。