论文部分内容阅读
目的:肿瘤免疫是T细胞免疫,由于肿瘤相关抗原的抗原性弱、肿瘤细胞主要组织相容复合物MHC及共刺激信号B7低表达或不表达,致使肿瘤抗原不能有效递呈,最终导致机体对肿瘤细胞的免疫耐受。基因重组技术的完善使由分子水平修饰肿瘤细胞的愿望成为现实。白细胞介素2(1L-2)是一种极为重要的免疫反应调节剂,可显著地提高免疫效应细胞的功能,本研究旨在探讨白介素2(hIL-2)基因转导对卵巢癌细胞系SKOV3生物学特性的影响及hIL-2基因修饰卵巢癌细胞作为肿瘤疫苗的可能性。 研究方法:PCR扩增hIL-2 cDNA,构建携带hIL-2 cDNA的逆转录病毒载体,将hIL-2 cDNA导入卵巢癌细胞SKOV3,检测IL-2的表达,观察hIL-2 cDNA转导对SKOV3细胞形态的影响,从细胞的增殖、致瘤性、粘附能力、免疫原性、对化疗药物治疗的敏感性及相关癌基因表达等多方面研究IL-2基因转移对SKOV3细胞生物学特性的影响。 结果:PCR扩增出IL-2 cDNA功能编码区,长490 bp,将其插入逆转录病毒载体pLXSN构建成重组载体pLIL-2SN,导入包装细胞系PA317,测定病毒滴度,转染空载体者为2.2~3.2×10~5CFU/ml,转染pLIL-2SN者为1.17~1.75×10~5CFU/ml,SKOV3与病毒上清共培养,将IL-2基因导入SKOV3细胞,经G418筛选出新酶素抗性克隆SKOV3/IL-2,挑出8个单克隆,培养上清IL-2活性为16~318U/10~6cell/24hr,免疫组化及RT-PCR均证实SKOV3/IL-2细胞可表达IL-2。 光学显微镜及形态计量学分析均显示SKOV3/IL-2细胞形态趋于一致,细胞面积增大,核浆比降低。电镜下见SKOV3/IL-2细胞胞质空泡化,染色质聚集,表现出一定凋亡征兆。SKOV3、SKOV3/Neo细胞核分裂相出现频率明显高于SKOV3/IL-2细胞; SKOV3/IL-2细胞生长曲线上升较SKOV3、SKOV3/Neo细胞缓慢,指数生长期细胞倍增时间延长;H~3-TdR掺入量SKOV3/IL-2细胞明显低于对照组,SKOV3/IL-2细胞增值能力下降;细胞周期的分析显示SKOV3/IL-2细胞G0/G1期阻滞,S/M期细胞减少;PCNA:SKOV3/IL-2细胞阳性细胞百分率较SKOV3、SKOV3/Neo无显著差别,但平均荧光强度较后两者降低,P<0.001。SKOV3、