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骨关节炎(Osteoarthritis,OA)是一种以骨关节软骨的退行性病变和继发骨质增生为特点的慢性关节疾病,其病理性进程中滑膜的病变会导致关节腔微环境稳态发生紊乱进而使疾病恶化,其病理特征主要包括:组织中蛋白酶活性的增加导致胞外基质(ECM)的降解,细胞分泌大量炎症因子促进OA的发生进程,细胞的凋亡恶化关节腔微环境等。因此,OA疾病中ECM的降解、细胞因子的分泌及细胞凋亡是研究其发病机制的重要靶点。在OA的治疗方面,药物治疗的方式具有使用方便、治疗效果较好、成本较低等特点,寻找安全性更高药效更好的药物对OA进行治疗受到了极大的关注。作为一种传统中药类物质淫羊藿苷能够促进软骨细胞增殖,成骨细胞分化,降低炎症因子及基质金属蛋白酶等。OA疾病发展过程中滑膜组织会产生炎症反应并继发性增生,而淫羊藿苷是否能够通过对OA滑膜细胞进行调控从而达到治疗OA的目的尚不清楚。因此,本文以OA滑膜细胞为研究对象,以细胞活力、增殖、迁移以及不同细胞因子表达情况为指标,探索淫羊藿苷对OA滑膜细胞的调控作用及其机制,为OA的药物治疗途径提供参考。本课题主要研究工作和结果如下:(1)采用组织块培养法进行OA滑膜细胞的提取,并对所提细胞进行传代培养。(2)淫羊藿苷处理OA滑膜细胞后运用MTS方法检测不同浓度的淫羊藿苷对于细胞的活性影响及探讨该药物的毒性作用,并筛选出最佳药物作用浓度:0nM,100nM,500nM,1μM;采用流式细胞术检测淫羊藿苷处理OA滑膜细胞后细胞周期的变化,结果发现进入S期和G2/M期的细胞量增多,细胞出现增殖;采用EdU法检测淫羊藿苷处理OA滑膜细胞后细胞增殖的情况,结果显示在一定浓度范围内淫羊藿苷能够促进细胞增殖。(3)淫羊藿苷处理OA滑膜细胞后收集总RNA和总蛋白,采用Real-time PCR法检测MMP14和GRP78 mRNA表达量的变化;采用Western blot法检测MMP14和GRP78蛋白表达量的变化;采用免疫荧光法检测MMP14和IL-1β的表达。结果发现淫羊藿苷能够抑制MMP14和GRP78的基因以及蛋白的表达,并且也能降低IL-1β的表达水平。(4)淫羊藿苷处理细胞后运用Transwell法检测细胞迁移的情况,结果显示淫羊藿苷能够抑制OA滑膜细胞的迁移。并且抑制作用随着药物浓度升高而增强。综上所述,我们证实在一定浓度范围内淫羊藿苷对OA滑膜细胞无毒性,并且可以降低MMP14、GRP78和IL-1β的表达,从而积极调控OA滑膜细胞,进而改变关节腔微环境,对骨关节炎的治疗具有积极作用。