水稻白绿叶基因WGL1的定位与克隆

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叶色突变体是研究光合色素合成,叶绿体发育调控和光合作用机制的重要材料。目前的研究结果表明,水稻叶色相关基因在12条染色体上均有分布,已报道与叶色相关的水稻基因已有70多个。叶绿素是植物进行光合作用的主要色素,在植物的生长发育中起着重要的作用,叶绿体是光合作用的主要场所,光合色素镶嵌在叶绿体的类囊体膜上。叶绿素合成过程中需要一系列酶的参与,NADPH-原叶绿素酸酯氧化还原酶(POR)是一种光依赖型酶,在催化原脱植基叶绿素(pchlide)还原成脱植基叶绿素(chlide)的过程中有关键性作用。水稻中有两种POR亚型,即OsPORA和OsPORB。OsPORA和OsPORB在黑暗条件下均有表达,但光照条件下OsPORA迅速减少;OsPORB表达稳定不变。OsPORA负责PLB的形成,在水稻整个生育期叶绿素的合成过程中起到关键作用,与拟南芥AtPORA和AtPORB功能相似;OsPORB是高光条件下,叶片中叶绿素的合成所必需的,与拟南芥AtPORC和AtPORB功能相似。  粳稻品种‘日本晴’(Nipponbare)经甲基磺酸乙酯(EMS)诱变后获得了稳定遗传的白绿叶突变体wgll,该突变体在四叶期前叶片为淡绿色,随着叶片的伸长老叶叶尖变白同时伴有褐色斑点,但是抽穗期之后叶片恢复为淡绿色。光合色素含量测定结果表明,wgll突变体叶色异常与叶绿素a、叶绿素b及类胡萝卜素含量降低相关;透射电镜观察分析表明,突变体叶肉细胞中叶绿体的数目以及叶绿体中基粒数目减少,导致叶绿体发育受损;遗传分析结果显示wgll突变体为单隐性核基因控制。利用图位克隆的方法将目的基因WGL1定位在第10染色体上,编码OsPORB的候选基因Os10g35370在编码区出现单碱基替换。互补实验结果验证了突变体的表型变化确实是由WGL1突变引起。RT-PCR表达分析结果发现,WGL1基因在水稻的茎、叶、鞘及穗中都有表达,但在叶片中表达量最高,根中几乎不表达;GUS染色也获得了相同的结果。这些研究结果为POR蛋白的功能研究以及叶绿体发育调控机制的研究提供了重要的理论基础。
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