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目的:为研究柚皮素(NAR)对处于脑缺血再灌注损伤中的神经细胞的保护作用及其可能机制,以SD大鼠为实验对象,采用体外原代大脑皮层神经细胞培养氧糖剥夺/再灌注(oxygen and glucose deprivation/reperfusion,OGD/Rep)模型探索柚皮素干预对处于脑缺血缺氧再灌注损伤的神经细胞在核因子E2相关因子(Nrf2)通路调控的抗氧化应激层面的作用关系,明确柚皮素在脑缺血再灌注损伤的神经保护作用方面的机制。方法:1、将培养好的在对数生长期的大鼠皮层神经元细胞进行免疫荧光染色并进行鉴定。2、将SD大鼠的大脑皮层神经细胞建立OGD/Rep模型。3、用不同浓度NAR干预48h后,检测细胞活性及凋亡情况,检测凋亡相关蛋白Capase-3、bax、bcl-2、CytC在蛋白和基因层面的表达水平。检测各组细胞中ROS、MDA和GSH水平及SOD活性。4、通过转染siRNA-Nrf2、OENrf2干扰Nrf2表达,进行OGD/Rep培养后,给予80μΜ的NAR处理48h后,检测细胞活性及凋亡情况。检测各组细胞ROS、MDA和GSH水平及SOD活性。检测Nrf2蛋白核内转移情况以及Nrf2、Keap1、HO-1和NOQ1蛋白和基因表达水平。结果:1、与正常组比较,模型组神经细胞活性低,凋亡率高(P<0.05),与模型组对比,NAR预处理后,神经细胞的活性提高、凋亡率下降,其中NAR-H组最为显著(P<0.05)。2、与正常组比较,模型组凋亡相关蛋白Capase-3,bax以及CytC的表达上调,而bcl-2表达下调(P<0.05)。与模型组对比,经过NAR预处理后,Capase-3,bax以及CytC的表达下调,而bcl-2表达上调,其中NAR-H组最为显著(P<0.05)。3、经过NAR预处理OGD/Rep模型神经细胞可上调SOD1、GSH水平,下调ROS、MDA水平。4、与模型组比较,NAR组和转染OENrf2组神经细胞活性更高,凋亡率更低(P<0.05);而转染Nrf2-siRNA组则相反(P<0.05)。5、与模型组比较,NAR组和转染OENrf2组SOD、GSH水平升高,ROS、MDA则水平下降(P<0.05);而转染Nrf2-siRNA组则无明显差异(P>0.05)。6、与模型组比较,NAR组和转染OENrf2组的神经细胞胞浆中Nrf2蛋白的表达水平高于细胞核内,(P<0.05);而转染Nrf2-siRNA组则相反(P<0.05)。7、NAR可上调Nrf2通路下游蛋白Nrf2、Keap1、HO-1和NOQ1的表达。结论:柚皮素可通过激活Nrf2介导的抗氧化途径,对培养氧糖剥夺/再灌注模型的神经细胞具有保护作用。