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虎皮病是苹果、梨在低温贮藏中后期发生的最严重的生理病害,其主要症状是:在果实表面出现褐色至深褐色的不规则、凹陷形病斑,形如烫伤,故又称褐烫病。此病一般只发生于果皮表层细胞,严重时也能危及果肉细胞,极大的影响了果实的品质。众多的实验表明,α-法尼烯与虎皮病的发生有关,α-法尼烯的生物合成是通过类异戊二烯途径中的甲羟戊酸途径,调控此途径的酶包括3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGR)、法尼基焦磷酸合成酶(FPPS)、α-法尼烯合成酶(AFS)。其中AFS是调控α-法尼烯合成的最直接的限速酶,它催化法尼基焦磷酸(FPP)转变为α-法尼烯。近年来通过α-法尼烯合成酶来研究虎皮病的分子机制已经成为国内外研究的热点问题。本研究根据α-法尼烯合成酶基因全长序列设计特定引物,构建RNAi载体和反义表达载体,利用根癌农杆菌介导转化丰产梨,以期进一步研究α-法尼烯合成酶的功能;同时,研究影响梨遗传转化过程的影响因素,完善了梨再生体系。主要结果如下:1、采用TRIZON法从丰产梨再生苗中提取了高质量的RNA,经过RT-PCR扩增得到了构建表达载体的长、短片段。2、利用RT-PCR技术获得了来源于α-法尼烯合成酶基因(PFS)编码区的两个基因片段,反向连接,经PCR扩增、限制性内切酶消化和序列测定,验证其序列和设计的相一致,成功构建了抑制α-法尼烯合成酶基因表达的RNAi表达载体PBI-L-S。3、成功构建了反义表达载体PBI-PFS-L,然后借助农杆菌介导法转化梨再生苗。将RNAi载体和反义载体遗传转化到丰产梨植株中,经过PCR检测初步确定两个载体已转入丰产梨植株苗中。4、通过研究抗生素浓度、AS等因素的影响,确定了遗传转化过程中的影响因子。