乌龟原代细胞培养及其对电离辐射抗性的初步研究

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目的:在体外建立乌龟细胞的原代培养体系,探讨原代培养的乌龟细胞受照射后DNA损伤随时间间隔的变化,以及在细胞周期分布、细胞凋亡等方面的变化。方法:乌龟脑细胞(TBCs)和肝细胞(TLCs)经体外原代和传代培养后,用直线离子加速器X射线以5Gy剂量照射,然后用单细胞凝胶电泳检测细胞DNA的损伤和修复情况,以鳜鱼仔鱼原代细胞作对照。TBCs经5Gy照射后培养5 d,用流式细胞仪测定其细胞周期变化。TBCs经8Gy照射后,在透射电镜下观察其超微结构变化。结果:(1)原代培养的TBCs和TLCs生长良好,传代TBCs前3代生长稳定,第4代出现聚集生长,第5代出现“自发转化”现象,至12代,“转化”后的细胞体系生长旺盛。传代TLCs不易增殖,第3代出现衰退。(2)5Gy剂量X射线能对乌龟原代细胞DNA造成损伤,照射后4 h,TBCs和TLCs均出现严重的损伤变化,但随着时间的推移,TBCs照射后24 h,TLCs照射后48 h,DNA损伤修复,与未照射组无显著性差异(P>0.05)。而鳜鱼仔鱼细胞受照射后,其损伤随时间推移愈加显著,至第3天大部分死亡。(3)TBCs经8 Gy剂量X射线照射后,出现以细胞核固缩为特征的细胞凋亡。细胞内可见部分线粒体肿胀,嵴模糊或消失。内质网肿胀和空泡化。(4)5Gy X射线照射TBCs 5 d后,未检测到明显的细胞周期改变。结论:(1)可在体外进行原代培养并进行传代的细胞为幼龄乌龟脑细胞。(2)原代培养的TBCs和TLCs经5Gy X射线照射后,细胞核DNA在照射后初期损伤严重,后期得到修复。(3)乌龟细胞具有一定的抗X射线辐射的能力。
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