【摘 要】
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背景和目的:P53在人体中是一种最常见的突变基因,在肿瘤的发生发展中起着重要作用。因此,构建检测P53蛋白的有效探测器在癌症研究领域中的意义重大。然而,目前缺乏检测野生型P53蛋白（WTP53）或区分野生型和突变型P53蛋白的方法。本课题组设计并构建了一个P53探测器,该探测器可检测细胞中WTP53的表达。此外,我们使用CRISPR-Cas9系统将P53探测器与白喉毒素结合在一起,构建了一个P53
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背景和目的:P53在人体中是一种最常见的突变基因,在肿瘤的发生发展中起着重要作用。因此,构建检测P53蛋白的有效探测器在癌症研究领域中的意义重大。然而,目前缺乏检测野生型P53蛋白（WTP53）或区分野生型和突变型P53蛋白的方法。本课题组设计并构建了一个P53探测器,该探测器可检测细胞中WTP53的表达。此外,我们使用CRISPR-Cas9系统将P53探测器与白喉毒素结合在一起,构建了一个P53人工基因线路,该人工基因线路可以特异性地杀死包括膀胱癌细胞在内的多种WTP53缺陷细胞。因此,基于P53蛋白探测器的研究将成为治疗膀胱癌的新方向。方法:通过绿色荧光蛋白（GFP）和红色荧光蛋白（mKate）来验证P53探测器的有效性,通过Caspase-3 ELISA实验和流式分析来检测细胞的凋亡水平。此外,本课题组构建了P53敲除细胞系,并在此细胞系中再次验证人工基因线路的有效性。结果:本研究成功地构建了能特异性检测细胞内P53蛋白表达水平的探测器,并构建了能特异性杀伤P53缺陷细胞的人工基因线路。
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