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本研究利用数字化基因表达谱(Digital Gene Expression Profile, DGEP)分析技术筛查感染猪繁殖与呼吸综合征病毒后差异表达的抗菌肽(Antimicrobial peptides, AMPs),并通过实时荧光定量PCR对其进行检测。将筛查到的AMPs在毕赤酵母表达系统进行表达,经镍柱、离子交换柱和透析技术进行纯化后,获得纯度达95%以上的重组蛋白。采用抑菌实验、MTT法、扫描电镜、实时荧光定量PCR技术对重组AMPs的抑菌活性、细胞毒性和抗炎作用进行检测。结果显示：1.利用生物信息学、DGEP数据库和实时荧光定量PCR筛选出15个具有表达差异的AMPs；2.根据毕赤酵母(Pichia pastoris)的偏好性对AMPs的基因进行密码子优化并人工合成密码子优化的序列,通过DNA重组技术构建重组质粒,采用电转化的方法将线性化的重组质粒导入Pichia pastoris中,最终建立了能够表达CST11、NK-lysin和β-defensin-2三种猪源AMPs的重组毕赤酵母,重组酵母经甲醇诱导表达后,表达上清液经ProteinPure Ni-NTA介质、离子交换介质进行纯化,重组蛋白CST11、NK-lysin和β-defensin-2的产量分别为30mg/L,12mg/L和9 mg/L；3.抑菌试验结果显示：重组CST11对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌,表皮葡萄球菌和枯草芽孢杆菌具有抑制作用,且能够抑制木瓜蛋白酶的活性,电镜观察到：经重组CST11处理的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌,细胞变短或变小,细胞壁皱缩,有可见细胞内容物流出；重组NK-lysin对大肠杆菌、甲型副伤寒沙门菌、金黄色葡萄球菌,表皮葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和藤黄微球菌具有抑制作用；重组β-defensin-2对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和短小芽孢杆菌具有抑制作用；4. NK-lysin和β-defensin-2能够抑制人肝癌细胞系SMMC-7721细胞的生长,且呈现浓度和时间依赖性。NK-lysin作用SMMC-7721细胞后,整个细胞发生萎缩,细胞表面上的板状伪足和丝状伪足大量减少,相邻细胞间的连接显著减少。β-defensin-2处理SMMC-7721细胞后,细胞轮廓消失,细胞间界限不明显,细胞表面上的板状伪足和丝状伪足大量减少。Western blot结果显示：NK-lysin和β-defensin-2能够下调Fascin-1的表达；5.荧光定量PCR结果显示：NK-lysin和β-defensin-2均能够抑制脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞IL-lβ、IL-6、TNF-α、 iNOS和COX-2 mRNA的表达,具有一定的抗炎活性。